Efficient solubilization and purification of highly insoluble membrane proteins expressed as inclusion bodies using perfluorooctanoic acid.
Efficient solubilization and purification of highly insoluble membrane proteins expressed as inclusion bodies using perfluorooctanoic acid.
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DOI：
10.1016/j.pep.2017.10.012
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发表时间：
2018-03
影响因子：
1.6
通讯作者：
Glover KJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Plucinsky SM;Root KT;Glover KJ
由于膜蛋白在常规去污剂和/或离液序列高的溶液中的溶解度低，因此其纯化可能具有挑战性。促进包涵体形成的融合系统的引入促进了膜蛋白的过表达。在该协议中，我们描述了使用全氟辛酸（PFOA）作为一种援助，在高度疏水性的膜蛋白表达为包涵体的纯化。使用PFOA的优势有三个方面：首先，PFOA能够可靠地溶解包涵体，其次，PFOA与镍亲和色谱兼容，第三，PFOA可以有效地透析掉，以产生无洗涤剂的样品。为了证明使用PFOA的效用，我们表达并纯化了一段极疏水的膜蛋白小窝蛋白-1。
The purification of membrane proteins can be challenging due to their low solubility in conventional detergents and/or chaotropic solutions. The introduction of fusion systems that promote the formation of inclusion bodies has facilitated the overexpression of membrane proteins. In this protocol, we describe the use of perfluorooctanoic acid (PFOA) as an aid in the purification of highly hydrophobic membrane proteins expressed as inclusion bodies. The advantage of utilizing PFOA is threefold: first, PFOA is able to reliably solubilize inclusion bodies, second, PFOA is compatible with nickel affinity chromatography, and third, PFOA can be efficiently dialyzed away to produce a detergent free sample. To demonstrate the utility of employing PFOA, we expressed and purified a segment of the extremely hydrophobic membrane protein caveolin-1.
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DOI：
10.1016/j.bbamem.2016.01.007
发表时间：
2016-04
期刊：
Biochimica et biophysica acta
影响因子：
--
作者：
Root KT;Glover KJ
通讯作者：
Glover KJ
影响因子：
2.9
作者：
SHEPHERD, FH;HOLZENBURG, A
通讯作者：
HOLZENBURG, A
影响因子：
2.9
作者：
Rieth MD;Lee J;Glover KJ
通讯作者：
Glover KJ
DOI：
10.1016/0005-2736(80)90537-4
发表时间：
1980-01-01
期刊：
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA
影响因子：
--
作者：
ALLEN, TM;ROMANS, AY;SEGREST, JP
通讯作者：
SEGREST, JP
影响因子：
11.4
作者：
Goss, Kai-Uwe
通讯作者：
Goss, Kai-Uwe