A more efficient method to generate null mutants using Hprt-Cre with floxed alleles.
A more efficient method to generate null mutants using Hprt-Cre with floxed alleles.
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DOI：
10.1016/j.jpedsurg.2011.01.023
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发表时间：
2011-09
影响因子：
2.4
通讯作者：
Zaremba, Krzyztoff M.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nichol, Peter F.;Botham, Robert;Saijoh, Yukio;Reeder, Amy L.;Zaremba, Krzyztoff M.
关键词：
从杂合子无效/+育种中产生无法存活的纯合无效小鼠胚胎可能会消耗大量资源，窝中只有 25% 的胚胎是无效突变体。我们假设：1）我们可以使用次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶-Cre（Hprt-Cre）（受精时在雌性种系中活跃）将一窝中纯合无效小鼠胚胎的数量加倍，而不减少窝产仔数；2）这些纯合无效突变体将与通过传统无效/+育种产生的突变体相同。为了检验这一假设，我们使用了条件等位基因 Fgfr2IIIbflox。该等位基因重组后与 Fgfr2IIIbnull 等位基因相同。 Fgfr2IIIbrec/+ 的 F1 代； HprtCre/+ 雌性是通过 Fgfr2IIIb+/+ 交配产生的； Hprtcre'/cre 雌性到 Fgfr2IIIbflox/flox 雄性。然后将 F1 雌性与 Fgfr2IIIbflox/flox 雄性交配。对F2胚胎进行基因分型，并分析肺、肠、四肢和脑的形态和组织学。 Hprt-Cre 交配策略导致 51% 的幼仔成为基因型纯合无效胚胎 (85/166)，而标准无效/+ 方法 (38/167) 为 23%。这些胚胎不表达 Fgfr2IIIb 转录物，并且在表型上与通过标准无效/+育种产生的无效胚胎相同。 Hprt-Cre 交配策略增加了窝中纯合突变胚胎的数量，而不会减少窝产仔数。通过这种方法产生的胚胎在表型上与标准杂合育种的胚胎相同。我们向使用依赖于纯合无效胚胎生成的模型系统的研究人员推荐这种方法。
The generation of non-viable homozygous null mouse embryos from heterozygote null/+ breedings can be highly resource consuming, with only 25% of the embryos in the litter being null mutants. We hypothesized that 1) we could double the number of homozygous null mouse embryos in a litter without reducing litter size using Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase-Cre (Hprt-Cre) (which is active in the female germ line at the time of fertilization) and 2) these homozygous null mutants would be identical to mutants generated through traditional null/+ breedings. To test this hypothesis we used a conditional allele Fgfr2IIIbflox. This allele when recombined is identical to the Fgfr2IIIbnull allele. An F1 generation of Fgfr2IIIbrec/+; HprtCre/+ females was created by mating Fgfr2IIIb+/+; Hprtcre′/cre females to a Fgfr2IIIbflox/flox male. The F1 females were then mated to a Fgfr2IIIbflox/flox male. F2 embryos were genotyped and the morphology and histology of the lungs, intestine, limbs and brain was analyzed. The Hprt-Cre mating strategy results in 51% of pups being genotypic homozygous null embryos (85/166) versus 23% for the standard null/+ approach (38/167). These embryos did not express the Fgfr2IIIb transcript and were phenotypically identical to null embryos generated through standard null/+ breedings. The Hprt-Cre mating strategy increases the number of homozygous mutant embryos in a litter without decreasing litter size. Embryos generated through this approach are phenotypically identical to those from standard heterozygous breedings. We recommend this approach to investigators using an model system that relies on the generation of homozygous null embryos.
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