猪轮状病毒Gottfried株和SB-1A株截短VP8基因的原核表达、蛋白纯化及免疫原性分析
猪轮状病毒Gottfried株和SB-1A株截短VP8基因的原核表达、蛋白纯化及免疫原性分析
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DOI：
10.13200/j.cjb.2013.08.6.weixm.001
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
崔玉东
中科院分区：
文献类型：
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作者：
魏晓曼;闻晓波;冉旭华;崔玉东
目的原核表达猪轮状病毒（porcine rotavirus,PRV）Gottfried株和SB-1A株截短的VP8＊基因,纯化重组蛋白,并检测其免疫原性。方法经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfried VP4和pCR4-SB-1A VP4中分别扩增截短的VP8＊基因（△VP8＊,64～223位氨基酸）,分别插入原核表达载体pET-28a（＋）中,构建重组表达质粒pET-28a-Gottfried-△VP8＊和pET-28a-SB-1A-△VP8＊,分别转化大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。应用ProBondTMResin纯化两种重组蛋白,重组蛋白与A（lOH）3佐剂混合后,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平。结果两种重组表达质粒经双酶切和测序证实构建正确;表达的两种目的蛋白相对分子质量约25 000,均以包涵体和可溶性两种形式存在,均可与鼠源抗Histag单克隆抗体特异性结合;纯化的两种重组蛋白纯度均在95%以上,免疫BALB/c小鼠可产生较高的血清抗体水平。结论成功在大肠埃希菌中表达了PRV Gottfried株和SB-1A株截短的VP8＊基因,纯化的两种蛋白免疫原性较好,为进一步研制安全、高效的PRV亚单位疫苗奠定了基础。