Antigen-free control wells in an ELISA set-up for the determination of autoantibodies against G protein-coupled receptors-a requisite for correct data evaluation.
Antigen-free control wells in an ELISA set-up for the determination of autoantibodies against G protein-coupled receptors-a requisite for correct data evaluation.
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DOI：
10.1007/s00216-018-1172-x
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发表时间：
2018-08
影响因子：
4.3
通讯作者：
Wenzel K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Haberland A;Müller J;Wallukat G;Wenzel K
第一个针对 G 蛋白偶联受体（例如 β2 肾上腺素受体）的功能性自身抗体早在上世纪 80 年代初，人们就已经通过检测显示哮喘患者的功能活动被发现。近 40 年后的今天，此类自身抗体的测量仍然是一个挑战。能够显示此类自身抗体针对 G 蛋白偶联受体的功能活性的生物测定仍然是其检测和分类的最佳选择，当另外利用特定受体阻滞剂来中和该效应时。基于活细胞的生物测定对实验室提出了特定要求，因此并不适合每个常规实验室。因此，理想情况下，常规诊断需要基于例如不同的分析进行不同的分析。固相技术，例如酶联免疫吸附测定（ELISA）技术。在这里，我们正在努力，使用此类自身抗体的精确表位（如果已知）来捕获自身抗体，或者使用固定在塑料载体上的生物或人工膜中的完整受体（ELISA原理）。在这里，我们质疑并讨论此类测试的结果，特别是，根据 Güven 等人已经收集的甚至非激动作用自身抗体的多种经验，如果没有并行提供对照（例如未包被的塑料载体或相应的无受体膜包衣）作为对照。 （《免疫方法杂志》403：26-36）。
First functional acting autoantibodies against G protein-coupled receptors such as the beta2-adrenoceptor in e.g. asthmatic patients have already been discovered in the early 1980s of the last century using assays that show their functional activity. Today, almost 40 years later, the measurement of such autoantibodies is still a challenge. Bioassays able to show the functional activity of such autoantibodies against G protein-coupled receptors are still the ne plus ultra for their detection and also classification when additionally exploiting specific receptor blockers for the neutralisation of the effect. Bioassays based on living cells make specific demands on the laboratories and are, therefore not suitable for every routine laboratory. Routine diagnostics, therefore, ideally requires different assays based on e.g. solid-phase technology, such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) technology. Here, endeavours are going on, using either the exact epitopes of such autoantibodies, if known, for trapping the autoantibodies, or the complete receptor in biological or artificial membranes that are immobilised onto a plastic carrier (ELISA principle). Here, we question and discuss the outcome of such tests, especially, if no controls such as the non-coated plastic carrier or the corresponding receptor-free membrane coat is offered as control in parallel, in light of the manifold experiences already collected with even non-agonistic acting autoantibodies by Güven et al. (J Immunol Methods 403:26–36,).
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