Receptor mediated genomic action of the 1,25(OH)2D3 hormone: expression of the human vitamin D receptor in E. coli.
Receptor mediated genomic action of the 1,25(OH)2D3 hormone: expression of the human vitamin D receptor in E. coli.
复制标题
受体介导的 1,25(OH)2D3 激素的基因组作用：人类维生素 D 受体在大肠杆菌中的表达。
DOI：
10.1016/0960-0760(95)00112-d
复制
发表时间：
1995
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Haussler,MR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hsieh,JC;Nakajima,S;Galligan,MA;Jurutka,PW;Haussler,CA;Whitfield,GK;Haussler,MR
核维生素 D 受体 (VDR) 以高亲和力结合 1,25-二羟基维生素 D3(1,25(OH)2D3) 激素，并通过与维生素 D 反应元件 (VDRE) 结合来激发其刺激靶细胞中基因表达的作用。骨钙素、骨桥蛋白、β3整合素和维生素 D-24-OHase 等正向控制基因中的 VDRE 是带有三个核苷酸间隔区的直接六核苷酸重复。目前的 VDR VDRE 相互作用研究利用了在大肠杆菌中过表达的全长人类维生素 D 受体 (hVDR)，纯化至接近同质 (> 95%)，并通过证明与单克隆抗体 9A7γ 的高亲和力激素结合和反应性证实了其真实性。表达的 hVDR 显示严格依赖视黄醇 X 受体 (RXR) 家族与大鼠骨钙素基因中的维生素 D 反应元件 (VDRE) 的结合。 DNA 结合域 (Δ134) 在大肠杆菌中的类似过度表达仅包含 hVDR 的残基 4-133，产生了具有内在 DNA 结合活性的受体种类。当用几种天然激素反应元件进行测试时，全长和Δ134 hVDR 都保留了相似的 DNA 结合特异性，表明 N 末端锌指区域决定了 hVDR-DNA 序列选择性。该分子的 C 末端区域是激素结合所必需的，并通过 hVDR 和 RXR 之间的异二聚化赋予受体具有非常高亲和力 DNA 结合的特性。 RXR 共受体的天然配体 9-cis 视黄酸可抑制 VDR-RXR 与 VDRE 的结合以及 1,25(OH)2D3 刺激的转录，表明 9-cis 视黄酸将 RXR 从 VDR 募集出去，形成 RXR 同二聚体。
The nuclear vitamin D receptor (VDR) binds the 1,25-dihydroxyvitamin D3(1,25(OH)2D3) hormone with high affinity and elicits its actions to stimulate gene expression in target cells by binding to the vitamin D-responsive element (VDRE). VDREs in such positively controlled genes as osteocalcin, osteopontin, β3integrin and vitamin D-24-OHase are direct hexanucleotide repeats with a spacer of three nucleotides. The present studies of VDR VDRE interaction utilized full-length human vitamin D receptor (hVDR) that was overexpressed in E. coli, purified to near homogeneity (> 95%), and its authenticity confirmed by demonstrating high affinity hormone binding and reactivity to monoclonal antibody 9A7γ. The expressed hVDR displays strict dependence on the family of retinoid X receptors (RXRs) for binding to the vitamin D-responsive element (VDRE) in the rat osteocalcin gene. Similar overexpression in E. coli of the DNA binding domain (Δ134), containing only residues 4–133 of hVDR, generated a receptor species that possesses intrinsic DNA binding activity. Both full-length and Δ134 hVDRs retain similar DNA binding specificities when tested with several natural hormone responsive elements, indicating that the N-terminal zinc finger region determines hVDR-DNA sequence selectivity. The C-terminal region of the molecule is required for hormone binding and confers the receptor with the property of very high affinity DNA binding, via heterodimerization between hVDR and RXR. A natural ligand for the RXR co-receptor, 9-cis retinoic acid, suppresses both VDR-RXR binding to the VDRE and 1,25(OH)2D3stimulated transcription, indicating that 9-cis retinoic acid recruits RXR away from VDR to instead form RXR homodimers.