In‐situ‐Synthese von hochdichten RNA‐Mikroarrays mittels Photolithographie
In‐situ‐Synthese von hochdichten RNA‐Mikroarrays mittels Photolithographie
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DOI：
10.1002/ange.201806895
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发表时间：
2018-10
影响因子：
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通讯作者：
Jory Lietard;Dominik Ameur;Masad J. Damha;Mark M. Somoza
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Jory Lietard;Dominik Ameur;Masad J. Damha;Mark M. Somoza
观察DNA-Mikroarns Seit drei Jahrzehnten etabliert sind，stellte sich die synthes des RNA-pendants bis jetzt als sehr schwierig dar.Im Folgenden bechreiben Wir die Erste in-Site-Set-Set von Hochdichten RNA-Mikrona als Basengemisch，mithilfe von Phootopletie and lichtempfindlichen Phoporamiden.MIT Einer Koppengseffizienz，De MIT der von DNA-Monomeren vergleichbar ist，können nn RNA-Origonukletic MIT einer Mindestlänge von 30 Nukleitiden Under Verwendung von Modifizierten Phocoramiditen Efficient hersterellt.Ein zweistufiges Protokoll ermöglicht die abspaltung der Schutzgruppen des Phosphopdiester，der exozykillischen amine and des 2‘-羟基.用杂交法和酶分析法对DNA进行了鉴定。我们一直在合成这些einer komplexen RNA-Bibliothek，它们的排列是262 144个einzigartige Sequenzen tenält，这是一种来自Kleiner Fläche hochdicht的合成。我们的DNA/RNA-Mikroaras vor der erkunden mögliche Anwendungen Durch Kartierung der SequenzSpezifität von RNase Hii.HERGISTELTE RNA-MIKROARATION Könnnen ALS leistungsstarke Plattformen für gro？angelete StrukTurn-und FunktionsStuddien von RibonukleinsäUren gesehen.
Obwohl hochdichte DNA‐Mikroarrays bereits seit drei Jahrzehnten etabliert sind, stellte sich die Synthese des RNA‐Pendants bis jetzt als sehr schwierig dar. Im Folgenden beschreiben wir die erste In‐situ‐Synthese von hochdichten RNA‐Mikroarrays als Basengemisch, mithilfe von Photolithographie und lichtempfindlichen Phosphoramiditen. Mit einer Kopplungseffizienz, die mit der von DNA‐Monomeren vergleichbar ist, können nun RNA‐Oligonukleotide mit einer Mindestlänge von 30 Nukleotiden unter Verwendung von modifizierten Phosphoramiditen effizient hergestellt werden. Ein zweistufiges Protokoll ermöglicht die Abspaltung der Schutzgruppen des Phosphodiesters, der exozyklischen Amine und des 2′‐Hydroxyls. Qualität und Identität der oberflächengebundenen RNA werden durch Hybridisierung und enzymatische Assays verifiziert. Wir zeigen durch die Synthese einer komplexen RNA‐Bibliothek, die durch Permutation 262 144 einzigartige Sequenzen enthält, dass eine hohe Anzahl von Oligonukleotiden auf kleiner Fläche hochdicht synthetisiert werden kann. Wir stellen ebenso chimäre DNA/RNA‐Mikroarrays vor und erkunden mögliche Anwendungen durch Kartierung der Sequenzspezifität von RNase HII. In situ hergestellte RNA‐Mikroarrays können als leistungsstarke Plattformen für groß angelegte Struktur‐ und Funktionsstudien von Ribonukleinsäuren gesehen werden.