Crystals in minutes: instant on-site microcrystallisation of various flavours of the CYP102A1 (P450BM3) haem domain
Crystals in minutes: instant on-site microcrystallisation of various flavours of the CYP102A1 (P450BM3) haem domain
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几分钟内形成晶体：各种口味的 CYP102A1 (P450BM3) 血红素结构域即时现场微结晶
DOI：
10.1002/anie.201913407
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
O.
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Stanfield;J. K.;Omura;K.;Matsumoto;A.;Kasai;C.;Sugimoto;H.;Shiro;Y.;Watanabe;Y.;Shoji;O.
尽管 CYP102A1 (P450BM3) 是研究最广泛的金属酶之一，但修饰后其血红素结构域的结晶可能是一个挑战。晶体结构对于 P450BM3 作为生物催化剂的有效基于结构的设计是不可或缺的。松香烷二萜衍生物 N-松香酰-L-色氨酸 (AbiATrp) 是野生型 P450BM3 血红素结构域的出色结晶加速器，在 2 小时内形成可见晶体，并衍射至接近原子分辨率 1.22 Å。使用这些晶体作为交叉微晶种方法的种子，可以确定各种 P450BM3 血红素结构域晶体结构，其中包含先前不可结晶的诱饵分子和结合各种配体分子的各种人工金属卟啉，以及重标记的血红素结构域变体。本文报道的一些结构可用作 P450BM3 催化循环不同阶段的模型。
Despite CYP102A1 (P450BM3) representing one of the most extensively researched metalloenzymes, crystallisation of its haem domain upon modification can be a challenge. Crystal structures are indispensable for the efficient structure‐based design of P450BM3 as a biocatalyst. The abietane diterpenoid derivative N‐abietoyl‐l‐tryptophan (AbiATrp) is an outstanding crystallisation accelerator for the wild‐type P450BM3 haem domain, with visible crystals forming within 2 hours and diffracting to a near‐atomic resolution of 1.22 Å. Using these crystals as seeds in a cross‐microseeding approach, an assortment of P450BM3 haem domain crystal structures, containing previously uncrystallisable decoy molecules and diverse artificial metalloporphyrins binding various ligand molecules, as well as heavily tagged haem‐domain variants, could be determined. Some of the structures reported herein could be used as models of different stages of the P450BM3 catalytic cycle.