SIRT3去SUMO化修饰调节乳腺癌细胞MCF7增殖及化疗药物敏感性的研究
SIRT3去SUMO化修饰调节乳腺癌细胞MCF7增殖及化疗药物敏感性的研究
复制标题
DOI：
10.3969/j.issn.1674-8115.2021.12.003
复制
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
王田实
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
郝艳云;俞思慧;陆静;顾湘;张帆;程金科;王田实
目的·研究沉默调节蛋白3 (sirtuin 3,SIRT3)去SUMO化修饰对乳腺癌细胞的增殖和耐药性的影响。方法·用CRISPRCas9质粒pX330-sgRNA敲除MCF7乳腺癌细胞系SIRT3基因,构建SIRT3KO的MCF7细胞系;在此细胞系基础上,利用表达SIRT3 K288R (SUMO化修饰位点突变型)和SIRT3 WT (野生型)的反转录病毒,以及空载对照(Vector)病毒进行感染,以构建SIRT3 SUMO化修饰位点突变的细胞系及其对照细胞系。3种细胞株在相同条件下培养后进行细胞计数并在显微镜下进行观察,确定细胞数量和形态的变化;用不同浓度的阿霉素分别处理细胞24、48、72 h,检测3种细胞株的耐药程度。结果·成功构建了敲除SIRT3的MCF7细胞系,并利用反转录病毒感染构建了表达SIRT3 K288R和SIRT3 WT以及空载对照的细胞系;通过细胞计数发现,在相同培养时间下,SIRT3 K288R细胞系的增殖速率显著低于SIRT3 WT和Vector细胞系(P=0.000);在显微镜下测量非黏附性乳腺球群细胞的大小,发现SIRT3 K288R细胞系的直径较SIRT3 WT和Vector细胞系小,增殖缓慢。阿霉素耐药实验结果显示,在细胞培养24、48和72 h时,不同阿霉素浓度(1.25、2.5、5和10 μg/mL)处理下的SIRT3 K288R细胞系的活性均显著高于SIRT3 WT和Vector细胞系(均P<0.05);并且相比另外2个细胞系,阿霉素在SIRT3 K288R细胞系中的半数抑制浓度(IC_(50))也较高。结论·去SUMO化修饰的SIRT3能抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖,但增加其对阿霉素的耐药性。