USP17 is required for trafficking and oncogenic signaling of mutant EGFR in NSCLC cells.
USP17 is required for trafficking and oncogenic signaling of mutant EGFR in NSCLC cells.
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DOI：
10.1186/s12964-018-0291-5
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发表时间：
2018-11-08
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Burrows JF
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
McCann AP;Smyth P;Cogo F;McDaid WJ;Jiang L;Lin J;Evergren E;Burden RE;Van Schaeybroeck S;Scott CJ;Burrows JF
去泛素酶 USP17 在 NSCLC 中过度表达，并且已被证明是 EGFR 野生型 (WT) NSCLC 细胞生长和运动所必需的。 USP17 也是网格蛋白介导的 EGFR 内吞作用所必需的。在这里，我们研究了 USP17 缺失对 EGFR 突变 (MT) NSCLC 细胞生长以及 EGFR 内吞作用和信号传导的影响。特别是，我们检查了携带 EGFR 激活外显子 19 缺失 (HCC827) 或同时存在 L858R 激活突变和 T790M 耐药看门突变 (H1975) 的 NSCLC 细胞，这些突变使它们对 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 产生耐药性。进行了 MTT、台盼蓝和克隆形成测定、共聚焦显微镜、蛋白质印迹和细胞周期分析。 USP17 缺失会阻止携带 EGFR 外显子 19 缺失或 L858R/T790M 双突变的 EGFRMT NSCLC 细胞的生长。与 EGFRWT 细胞相反，USP17 耗竭也会触发 EGFRMT NSCLC 细胞凋亡。在这些 EGFRMT NSCLC 细胞中，网格蛋白介导的内吞作用需要 USP17，但突变 EGFR 受体的内化不需要 USP17。相反，USP17 的耗竭改变了这些受体在细胞内的定位，虽然它不会降低基础 EGFR 激活，但它会有效降低 Src 的激活，Src 是突变型 EGFR 依赖性致瘤性的关键激酶。最后，我们证明，当与 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 吉非替尼联合使用时，USP17 耗尽可以触发 EGFRWT NSCLC 细胞凋亡。我们的数据显示，USP17 促进突变 EGFR 的运输和致癌信号传导，并表明靶向 USP17 可能代表携带 EGFR 激活突变或耐药看门突变的 NSCLC 肿瘤的可行治疗策略。
The deubiquitinase USP17 is overexpressed in NSCLC and has been shown to be required for the growth and motility of EGFR wild-type (WT) NSCLC cells. USP17 is also required for clathrin-mediated endocytosis of EGFR. Here, we examine the impact of USP17 depletion on the growth, as well as EGFR endocytosis and signaling, of EGFR mutant (MT) NSCLC cells. In particular, we examine NSCLC cells harboring an EGFR activating exon 19 deletion (HCC827), or both the L858R activating mutation and the T790M resistance gatekeeper mutation (H1975) which renders them resistant to EGFR tyrosine kinase inhibitors (TKIs). MTT, trypan blue and clonogenic assays, confocal microscopy, Western blotting and cell cycle analysis were performed. USP17 depletion blocks the growth of EGFRMT NSCLC cells carrying either the EGFR exon 19 deletion, or L858R/T790M double mutation. In contrast to EGFRWT cells, USP17 depletion also triggers apoptosis of EGFRMT NSCLC cells. USP17 is required for clathrin-mediated endocytosis in these EGFRMT NSCLC cells, but it is not required for the internalization of the mutated EGFR receptors. Instead, USP17 depletion alters the localization of these receptors within the cell, and although it does not decrease basal EGFR activation, it potently reduces activation of Src, a key kinase in mutant EGFR-dependent tumorigenicity. Finally, we demonstrate that USP17 depletion can trigger apoptosis in EGFRWT NSCLC cells, when combined with the EGFR tyrosine kinase inhibitor (TKI) gefitinib. Our data reveals that USP17 facilitates trafficking and oncogenic signaling of mutant EGFR and indicates targeting USP17 could represent a viable therapeutic strategy in NSCLC tumours carrying either an EGFR activating mutation, or a resistance gatekeeper mutation.
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