Expression and purification of tag-free SARS-CoV-2 RNA-dependent RNA polymerase in Escherichia coli.
Expression and purification of tag-free SARS-CoV-2 RNA-dependent RNA polymerase in Escherichia coli.
复制标题
大肠杆菌中无标记的SARS-COV-2 RNA依赖性RNA聚合酶的表达和纯化。
DOI：
10.1016/j.xpro.2021.100357
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发表时间：
2021-03-19
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Johnson KA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dangerfield TL;Huang NZ;Johnson KA
来自SARS-CoV-2的RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）是重要的药物靶标，因为它负责病毒RNA基因组复制。重组RdRp的高效生产对于筛选治疗COVID-19的抗病毒药物非常重要。在这里，我们提出了我们的协议在大肠杆菌中表达无标签复制复合物蛋白质和随后的纯化。尽管多个纯化步骤增加了复杂性，但我们的方法提供了更大的活性，以更低的成本获得产量，并且比杆状病毒表达系统更快。有关本方案使用和执行的完整详细信息，请参阅。无标签的可溶性表达，在大肠杆菌中的高活性SARS-CoV-2聚合酶复合物提供了NSP-7/8/12 RNA聚合酶复合物的纯化方案包括的补充NSP 8的表达和纯化方案纯化的SARS-CoV-2 RNA聚合酶复合物催化快速进行性RNA复制2是一个重要的药物靶点，因为它负责病毒RNA基因组复制。重组RdRp的高效生产对于筛选治疗COVID-19的抗病毒药物非常重要。在这里，我们提出了我们的协议在大肠杆菌中表达无标签复制复合物蛋白质和随后的纯化。尽管多个纯化步骤增加了复杂性，但我们的方法提供了更大的活性，以更低的成本获得产量，并且比杆状病毒表达系统更快。
The RNA-dependent-RNA polymerase (RdRp) from SARS-CoV-2 is an important drug target because it is responsible for viral RNA genome replication. Efficient production of recombinant RdRp is important in screening antivirals to treat COVID-19. Here, we present our protocol for expression of tag-free replication complex proteins in E. coli and subsequent purification. Despite the added complexity of multiple purification steps, our methods provide greater activity, yield at lower cost, and are faster than baculovirus expression systems. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to. Soluble expression of tag-free, highly active SARS-CoV-2 polymerase complex in E. coli Purification protocol for NSP-7/8/12 RNA polymerase complex is provided Protocol for expression and purification of supplemental NSP8 included Purified SARS-CoV-2 RNA polymerase complex catalyzes fast processive RNA replication The RNA-dependent-RNA polymerase (RdRp) from SARS-CoV-2 is an important drug target because it is responsible for viral RNA genome replication. Efficient production of recombinant RdRp is important in screening antivirals to treat COVID-19. Here, we present our protocol for expression of tag-free replication complex proteins in E. coli and subsequent purification. Despite the added complexity of multiple purification steps, our methods provide greater activity, yield at lower cost, and are faster than baculovirus expression systems.
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