Identification of efflux systems for large anions and anionic conjugates as the mediators of methotrexate efflux in L1210 Cells.
Identification of efflux systems for large anions and anionic conjugates as the mediators of methotrexate efflux in L1210 Cells.
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鉴定大阴离子和阴离子缀合物的外排系统作为 L1210 细胞中甲氨蝶呤外排的介质。
DOI：
10.1016/0006-2952(96)00051-2
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发表时间：
1996
影响因子：
5.8
通讯作者：
Henderson,GB
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Saxena,M;Henderson,GB
甲氨蝶呤的两种atp依赖性外排系统已在具有甲氨蝶呤内流载体缺陷的L1210小鼠细胞变体的内外向囊泡中被鉴定出来。在40 μM [3H]条件下，甲氨蝶呤转运被抑制剂分成两部分，分别占总转运活性的62%和38%。低浓度的吲哚洛芬（Ki= 2.5 μM）、4-联苯乙酸（Ki= 5.3 μM）和氟比洛芬（Ki= 5.2 μM）对优势组分有抑制作用，而第二组分对溴磺基眼啡（Ki= 0.08 μM）、乙酸（Ki= 0.52 μM）和1-氯-2,4-二硝基苯（Ki= 0.77 μM）的谷胱甘肽偶联物有较高的敏感性。双磺酸胆红素是两种转运成分的有效抑制剂（Ki分别为1.5 μM和0.17 μM）。通过添加过量（100 μM）的谷胱甘肽偶联乙酸或联苯乙酸，可以实现不受其他途径干扰的转运活性分离。在不同底物浓度下，甲氨蝶呤通过阴离子敏感途径和共轭敏感途径传输的km值分别为170和250 μM。抑制剂特异性的比较表明，囊泡中阴离子敏感的运输活性代表了完整细胞中甲氨蝶呤的外排系统II，与先前在囊泡中确定的阴离子/阴离子共轭泵相同。偶联敏感活性对应于完整细胞中甲氨蝶呤的外排系统I，并且与高亲和谷胱甘肽偶联泵在囊泡中鉴定的系统相同。
Two ATP-dependent efflux systems for methotrexate have been identified in inside-out vesicles from an L1210 mouse cell variant with a defective influx carrier for methotrexate. Transport at 40 μM [3H]methotrexate was separated by inhibitors into two components comprising 62 and 38% of total transport activity. The predominant route was inhibited by low concentrations of indoprofen (Ki= 2.5 μM), 4-biphenylacetic acid (Ki= 5.3 μM), and flurbiprofen (Ki= 5.2 μM), whereas the second component showed a high sensitivity to the glutathione conjugates of bromosulfophthalein (Ki= 0.08 μM), ethacrynic acid (Ki= 0.52 μM), and 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (Ki= 0.77 μM). Bilirubin ditaurate was a potent inhibitor of both transport components (Ki= 1.5 and 0.17 μM, respectively). Separation of transport activities without interference from the other route was achieved by adding an excess (100 μM) of either the glutathione conjugate of ethacrynic acid or biphenylacetic acid. Double-reciprocal plots of transport at various substrate concentrations gave Kmvalues of 170 and 250 μM for methotrexate transport via the anion-sensitive and conjugate-sensitive routes, respectively. A comparison of inhibitor specificities indicated that the anion-sensitive transport activity in vesicles represents efflux system II for methotrexate in intact cells and is the same system identified previously in vesicles as an anion/anion conjugate pump. The conjugate-sensitive activity corresponds to efflux system I for methotrexate in intact cells and is the same system identified in vesicles as the high-affinity glutathione conjugate pump.
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