TGF-β1-Smad2/3信号转导通路在百草枯中毒致肺纤维化中的作用
TGF-β1-Smad2/3信号转导通路在百草枯中毒致肺纤维化中的作用
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DOI：
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
黄敏
中科院分区：
文献类型：
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作者：
王亚鹏;杨惠芳;蔡倩;朱玲勤;刘贺荣;黄敏
目的 观察百草枯（ＰＱ）染毒对人肺成纤维细胞的影响，探讨ＰＱ中毒致肺纤维化中转化生长 因子β １ －Ｓｍａｄ２／３蛋白（ＴＧＦ －β １） －Ｓｍａｄ２／３信号转导通路的作用。方法 体外培养人胚肺成纤维细胞（ＭＲＣ.－ ５），以终浓度为０、１２．５、２５、５０、１００、２００、４００μｍｏｌ ／Ｌ的 ＰＱ 处理细胞２４ｈ，四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ） 检测细胞存活率。使用终浓度５０μｍｏｌ ／Ｌ ＰＱ处理细胞６、８、１２、２４、４８、７２ｈ，检测ＰＱ在不同时间点对 细胞的损伤程度。终浓度０、２５、５０、１００μｍｏｌ ／Ｌ ＰＱ 处理细胞２４ｈ，酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）检测细胞 ＴＧＦ.－ β １蛋白表达水平，聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测细胞 ＴＧＦ －β１ｍＲＮＡ表达水平。为了观察ＰＱ染毒对 ＴＧＦ －β １／Ｓｍａｄ信号通路的影响，将 ＭＲＣ５细胞分成６组：正常对照组、２５μｍｏｌ ／Ｌ ＰＱ染毒组、５０μｍｏｌ ／Ｌ ＰＱ染毒组、１００μｍｏｌ ／Ｌ ＰＱ染毒组、ＴＧＦ －β １阳性对照组、ＴＧＦ －β １刺激组（１００μｍｏｌ ／Ｌ ＰＱ＋５０μｍｏｌ ／Ｌ ＴＧＦ －β １），免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）检测磷酸化Ｓｍａｄ２／３蛋白（ ｐ －Ｓｍａｄ２／３）表达水平。结果 与对照组比 较，ＭＲＣ －５细胞存活率随着ＰＱ剂量和时间的增加明显降低（ Ｐ ＜０．０５），呈剂量和时间依赖性；ＥＬＩＳＡ显 示，ＰＱ作用 ＭＲＣ －５细胞２４ｈ后，ＴＧＦ －β １蛋白表达升高至３７．４、４８．８、３９．３μｇ／ｍｌ，但诱导作用呈非剂 量依赖方式；ＲＴ－ＰＣＲ显示，随着ＰＱ浓度增加ＴＧＦ －β１ｍＲＮＡ表达水平明显升高，分别是对照组的３．５、 ６．９和９．７倍，诱导作用呈剂量依赖方式（ Ｐ ＜０．０５）；Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ显示，浓度为２５、５０、１００μｍｏｌ ／Ｌ ＰＱ 作用细胞２４ｈ后，ｐ －Ｓｍａｄ２、ｐ －Ｓｍａｄ３蛋白表达水平明显升高（ Ｐ ＜０．０５），给予细胞１００μｍｏｌ ／Ｌ ＰＱ＋ ５０μｍｏｌ ／Ｌ ＴＧＦ －β １共同刺激下，ｐ －Ｓｍａｄ２、ｐ －Ｓｍａｄ３ 蛋白量达到最多 （ Ｐ ＜０．０５）。结论 ＴＧＦ －β １、ｐ.－ Ｓｍａｄ２、ｐ －Ｓｍａｄ３的异常表达参与了ＰＱ致 ＭＲＣ５细胞损伤过程，ＴＧＦ －β １／Ｓｍａｄ信号通路激活在ＰＱ致肺 纤维化中发挥重要作用。