E2F1调节肾小管上皮细胞自噬对小鼠糖尿病肾病肾纤维化的作用研究
E2F1调节肾小管上皮细胞自噬对小鼠糖尿病肾病肾纤维化的作用研究
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DOI：
10.3969/j.issn.1000-4718.2022.06.012
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
石明隽
中科院分区：
文献类型：
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作者：
邹琴;李清璇;屈玲玲;安小敏;黄靖惠;王金艳;龙天华;石明隽
目的:探讨E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)是否可以通过调节肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)自噬而影响糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾纤维化进程,并探讨其可能机制。方法:将12只C57BL/6小鼠随机分为正常对照(normal control,NC)组和糖尿病(diabetes mellitus,DM)组,每组各6只,用链脲佐菌素(55 mg/kg,腹腔注射,每天1次,连续5 d)复制小鼠1型DM模型。16周时处死小鼠后检测血糖和24 h尿总蛋白;HE和Masson染色观察肾组织病理形态改变;免疫组织化学染色观察肾组织E2F1表达情况;Western blot和RT-qPCR检测肾组织E2F1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、自噬及纤维化相关指标表达的变化。高糖培养RTECs并分别转染敲减或过表达E2F1的质粒,Western blot法检测相关指标蛋白的表达情况。结果:与NC组相比,DM组小鼠血糖和24 h尿总蛋白均显著增高(P<0.05)。HE和Masson染色观察到DM组小鼠肾小管管腔塌陷,肾小球基底膜增厚,且肾间质有大量胶原纤维沉积。RTqPCR结果显示,与NC组相比,DM组小鼠E2F1、III型胶原(collagen type III,Col III)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的mRNA表达上调(P<0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)的mRNA表达下调(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC组比较,DM组小鼠肾组织及高糖培养的RTECs中E2F1、mTOR、自噬降解底物蛋白P62、Col III和α-SMA的蛋白表达上调(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平和微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)/LC3-I比值降低(P<0.05)。与空载体组相比,在高糖状态下转染敲减E2F1表达的质粒后,RTECs中mTOR、P62、Col III和α-SMA蛋白表达下调(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平和LC3-II/LC3-I比值升高(P<0.05);而过表达E2F1后,mTOR、P62、Col III和α-SMA的蛋白表达增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平和LC3-II/LC3-I比值降低(P<0.05)。结论:E2F1/mTOR可通过抑制RTECs自噬水平而促进小鼠DN肾纤维化进程。