Rapid Mapping of Protein Interactions Using Tag-Transfer Photocrosslinkers.
Rapid Mapping of Protein Interactions Using Tag-Transfer Photocrosslinkers.
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DOI：
10.1002/anie.201809149
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发表时间：
2018-12-17
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Radford SE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Horne JE;Walko M;Calabrese AN;Levenstein MA;Brockwell DJ;Kapur N;Wilson AJ;Radford SE
用化学交联质谱(XL-MS)分析蛋白质复合体，受到交联剂的侧链反应性和大小、反应速度慢以及交联物难以浓缩等因素的限制，特别是对于稀有的、瞬时的或动态的复合体。在这里，我们描述了两种新的XL试剂，其中包括一个甲硫磺酸盐(MTS)基团来标记引入到诱饵蛋白中的反应性半胱氨酸，以及一个基于残基无偏二氮杂光活化的XL基团来捕获它的相互作用伙伴(S)。还原去除诱饵将交联剂的硫醇片段转移到目标上，该片段可以烷基化并通过MS测序定位并用于浓缩，从而能够检测到低丰度的交联物。使用这些试剂和定制的UV LED照射平台，我们证明了最大交联率在10秒内实现。这种“标记和转移”方法的实用性是通过一个定义明确的肽/蛋白质调节相互作用(BID80-102/MCL-1)和一个伴侣/底物复合体的动态相互作用界面(Skp/OmpA)来展示的。
Analysing protein complexes by chemical crosslinking‐mass spectrometry (XL‐MS) is limited by the side‐chain reactivities and sizes of available crosslinkers, their slow reaction rates, and difficulties in crosslink enrichment, especially for rare, transient or dynamic complexes. Here we describe two new XL reagents that incorporate a methanethiosulfonate (MTS) group to label a reactive cysteine introduced into the bait protein, and a residue‐unbiased diazirine‐based photoactivatable XL group to trap its interacting partner(s). Reductive removal of the bait transfers a thiol‐containing fragment of the crosslinking reagent onto the target that can be alkylated and located by MS sequencing and exploited for enrichment, enabling the detection of low abundance crosslinks. Using these reagents and a bespoke UV LED irradiation platform, we show that maximum crosslinking yield is achieved within 10 seconds. The utility of this “tag and transfer” approach is demonstrated using a well‐defined peptide/protein regulatory interaction (BID80‐102/MCL‐1), and the dynamic interaction interface of a chaperone/substrate complex (Skp/OmpA).
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影响因子：
16.6
作者：
Manzi, Lucio;Barrow, Andrew S.;Scott, Daniel;Layfield, Robert;Wright, Timothy G.;Moses, John E.;Oldham, Neil J.
通讯作者：
Oldham, Neil J.
DOI：
10.1039/a707586c
发表时间：
1998-05-01
期刊：
JOURNAL OF THE CHEMICAL SOCIETY-PERKIN TRANSACTIONS 2
影响因子：
--
作者：
Admasu, A;Gudmundsdottir, AD;Crocker, PJ
通讯作者：
Crocker, PJ
DOI：
10.1074/mcp.m111.014126
发表时间：
2012-03
期刊：
Molecular & cellular proteomics : MCP
影响因子：
--
作者：
Leitner A;Reischl R;Walzthoeni T;Herzog F;Bohn S;Förster F;Aebersold R
通讯作者：
Aebersold R
影响因子：
14.8
作者：
通讯作者：
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影响因子：
--
作者：
Gubbens, Jacob;Ruijter, Eelco;de Kroon, Anton I. P. M.
通讯作者：
de Kroon, Anton I. P. M.