Imaging of Metabolic Status in 3D Cultures with an Improved AMPK FRET Biosensor for FLIM.
Imaging of Metabolic Status in 3D Cultures with an Improved AMPK FRET Biosensor for FLIM.
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DOI：
10.3390/s16081312
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发表时间：
2016-08-19
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Sardini A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chennell G;Willows RJ;Warren SC;Carling D;French PM;Dunsby C;Sardini A
我们描述了一种方法，非侵入性地图时空生化和生理变化的3D细胞培养中使用福斯特共振能量转移（FRET）生物传感器表达的肿瘤球体。特别是，我们提出了一种改进的腺苷一磷酸（AMP）激活的蛋白激酶（AMPK）FRET生物传感器，mTurquoise2 AMPK活性报告（T2AMPKAR），荧光寿命成像（FLIM）读出，我们已经评估了2D和3D文化。我们在2D细胞培养中的结果表明，用mTurquoise2（mTq2FP）替换原始FRET生物传感器中的FRET供体增强型青色荧光蛋白（ECFP），AMPK活性报告基因（AMPKAR），增加了对AMPK激活的响应的动态范围，如使用直接AMPK激活剂991所证明的。我们证明了3D FLIM的T2AMPKAR FRET生物传感器中表达的肿瘤球体使用双光子激发。
We describe an approach to non-invasively map spatiotemporal biochemical and physiological changes in 3D cell culture using Forster Resonance Energy Transfer (FRET) biosensors expressed in tumour spheroids. In particular, we present an improved Adenosine Monophosphate (AMP) Activated Protein Kinase (AMPK) FRET biosensor, mTurquoise2 AMPK Activity Reporter (T2AMPKAR), for fluorescence lifetime imaging (FLIM) readouts that we have evaluated in 2D and 3D cultures. Our results in 2D cell culture indicate that replacing the FRET donor, enhanced Cyan Fluorescent Protein (ECFP), in the original FRET biosensor, AMPK activity reporter (AMPKAR), with mTurquoise2 (mTq2FP), increases the dynamic range of the response to activation of AMPK, as demonstrated using the direct AMPK activator, 991. We demonstrated 3D FLIM of this T2AMPKAR FRET biosensor expressed in tumour spheroids using two-photon excitation.
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