Enhanced MALDI-TOF MS analysis of phosphopeptides using an optimized DHAP/DAHC matrix.
Enhanced MALDI-TOF MS analysis of phosphopeptides using an optimized DHAP/DAHC matrix.
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使用优化的 DHAP/DAHC 矩阵增强磷酸肽的 MALDI-TOF MS 分析
DOI：
10.1155/2010/759690
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发表时间：
2010
影响因子：
--
通讯作者：
Yang F
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hou J;Xie Z;Xue P;Cui Z;Chen X;Li J;Cai T;Wu P;Yang F
在基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）中，选择合适的基质溶液是提高磷酸肽电离效率的最有效手段之一。在本研究中，我们系统地评估了2,6 -二羟基苯乙酮（DHAP）和柠檬酸氢二铵（DAHC）的基质组合，并证明了低比例的DHAP/DAHC基质更有效地促进磷酸肽的电离。MALDI-TOF-MS在正离子和负离子模式下均可检测到α-酪蛋白和β-酪蛋白胰蛋白酶消化的低微摩尔水平的磷酸肽，无需脱盐或磷酸肽富集。与DHB/PA基质相比，优化后的dhp /DAHC基质具有更好的样品均匀性和更高的磷酸化肽测量灵敏度，特别是在评估多个磷酸化肽时。最后，应用DHAP/DAHC基质鉴定α-酪蛋白和β-酪蛋白的磷酸化位点，并通过MALDI-TOF/TOF质谱分析细胞周期蛋白依赖性激酶-1 （CDK1）处理的人组蛋白H1的两个磷酸化位点。
Selecting an appropriate matrix solution is one of the most effective means of increasing the ionization efficiency of phosphopeptides in matrix-assisted laser-desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). In this study, we systematically assessed matrix combinations of 2, 6-dihydroxyacetophenone (DHAP) and diammonium hydrogen citrate (DAHC), and demonstrated that the low ratio DHAP/DAHC matrix was more effective in enhancing the ionization of phosphopeptides. Low femtomole level of phosphopeptides from the tryptic digests of α-casein and β-casein was readily detected by MALDI-TOF-MS in both positive and negative ion mode without desalination or phosphopeptide enrichment. Compared with the DHB/PA matrix, the optimized DHAP/DAHC matrix yielded superior sample homogeneity and higher phosphopeptide measurement sensitivity, particularly when multiple phosphorylated peptides were assessed. Finally, the DHAP/DAHC matrix was applied to identify phosphorylation sites from α-casein and β-casein and to characterize two phosphorylation sites from the human histone H1 treated with Cyclin-Dependent Kinase-1 (CDK1) by MALDI-TOF/TOF MS.
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DOI：
10.1016/1044-0305(95)00675-3
发表时间：
1996-03-01
影响因子：
3.2
作者：
Busman, M;Schey, KL;Knapp, DR
通讯作者：
Knapp, DR
影响因子：
7.4
作者：
Xu, Chong-Feng;Wang, Huaibin;Neubert, Thomas A.
通讯作者：
Neubert, Thomas A.
DOI：
10.1016/s1044-0305(98)00129-9
发表时间：
1999-01-01
影响因子：
3.2
作者：
Asara, JM;Allison, J
通讯作者：
Allison, J
影响因子：
4.4
作者：
Khan, M;Takasaki, H;Komatsu, S
通讯作者：
Komatsu, S
影响因子：
3.7
作者：
Krintel C;Osmark P;Larsen MR;Resjö S;Logan DT;Holm C
通讯作者：
Holm C