Acquisition of resistance to avian leukosis virus subgroup B through mutations on tvb cysteine-rich domains in DF-1 chicken fibroblasts.
Acquisition of resistance to avian leukosis virus subgroup B through mutations on tvb cysteine-rich domains in DF-1 chicken fibroblasts.
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DOI：
10.1186/s13567-017-0454-1
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发表时间：
2017-09-13
影响因子：
4.4
通讯作者：
Han JY
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lee HJ;Lee KY;Park YH;Choi HJ;Yao Y;Nair V;Han JY
禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）是一种可引起禽类肿瘤的逆转录病毒，其在家禽群中的垂直和水平传播造成了巨大的经济损失。尽管发现了特定的宿主受体，但很少有关于通过遗传修饰调节病毒易感性的报道。因此，我们使用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术在DF-1鸡成纤维细胞中工程化获得对ALV亚群B的抗性。使用这种方法，我们有效地修改了肿瘤病毒基因座B（tv B）基因，编码TVB受体，这是ALV亚型B进入宿主细胞所必需的。通过扩增单个DF-1克隆，我们确定了人工产生的TVB受体富含半胱氨酸结构域（CRD）中的提前终止密码子赋予对ALV亚型B的抗性。此外，我们发现CRD 2的半胱氨酸残基（C80）在ALV亚群B进入中起着至关重要的作用。这些结果表明，CRISPR/Cas9介导的基因组编辑可用于有效地修饰禽类细胞，并建立对病毒感染具有抗性的新型鸡细胞系。本文的在线版本（doi：10.1186/s13567-017-0454-1）包含补充材料，可供授权用户使用。
Avian leukosis virus (ALV) is a retrovirus that causes tumors in avian species, and its vertical and horizontal transmission in poultry flocks results in enormous economic losses. Despite the discovery of specific host receptors, there have been few reports on the modulation of viral susceptibility via genetic modification. We therefore engineered acquired resistance to ALV subgroup B using CRISPR/Cas9-mediated genome editing technology in DF-1 chicken fibroblasts. Using this method, we efficiently modified the tumor virus locus B (tvb) gene, encoding the TVB receptor, which is essential for ALV subgroup B entry into host cells. By expanding individual DF-1 clones, we established that artificially generated premature stop codons in the cysteine-rich domain (CRD) of TVB receptor confer resistance to ALV subgroup B. Furthermore, we found that a cysteine residue (C80) of CRD2 plays a crucial role in ALV subgroup B entry. These results suggest that CRISPR/Cas9-mediated genome editing can be used to efficiently modify avian cells and establish novel chicken cell lines with resistance to viral infection. The online version of this article (doi:10.1186/s13567-017-0454-1) contains supplementary material, which is available to authorized users.
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