Parakrine Effekte der trophoblastären Progranulinexpression auf humane umbilikale Endothelzellen in-vitro
Parakrine Effekte der trophoblastären Progranulinexpression auf humane umbilikale Endothelzellen in-vitro
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滋养层颗粒体蛋白前体表达对体外人脐带内皮细胞的旁分泌作用
DOI：
10.1055/s-0037-1600075
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发表时间：
2017
影响因子：
2.7
通讯作者：
Stubert J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Szewczyk M;Spitschak A;Knoll S;Richter DU;Reimer T;Pützer B;Stubert J
方法：<s:2> r die Untersuchungen wurden plazenten - expleltkulturen aus Plazentagewebe von elektiv terminierten unauffälligen Schwangerschaften< 14+ 0 SSW月经后verwendet。在体外实验模型中，研究了前颗粒蛋白转导与腺病毒素（Ad）载体的关系。在Vorfeld细胞滋养母细胞选择性Denudierung des Syncytiotrophoblasten和vorsictige trypsininierung（0.03%， 5分钟）中，Eine erfolfolicher转导被观察。免疫组织化学检测Ki-67 ermöglichte eine半定量Beurteilung der增殖villösen卵细胞滋养细胞。Aus der Nabelschnur gesunder Termplazenten wurden primäre人脐草venöse内皮素（HUVECs）分离物与<s:1> ber den Nachweis des von-Willebrand-Faktors免疫组织化学特征。Zur Überprüfung parakriner在条件条件下对HUVECs孵育的影响（30-u）。50% ig <s:1> ber 8和16h)和anschließenden analystien zur Zytotoxizität和Viabilität sowie die beestimmung von ICAM-1和E-Selectin。研究结果表明：小鼠PGRN konnte在雏菊中的表达（Kulturüberständen）与雏菊中PGRN konnte的表达（22 ng/ml vs. 350 ng/ml； P< 0.001）显著相关。In diesem Zeitraum konnte durch den免疫组织化学，Nachweis eine e - cadherin阴性Zellschicht eine vollständige细胞滋养细胞带再生。德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国孵育16h孵育48h， ICAM-1表达显著，pgrn表达显著（1,25 vs. 1,06； P= 0,017）。e -选择蛋白表达的非特异性研究。腺病毒基因转移ist eine gezielte Überexpression des trophoblastären proanulins in den villösen滋养母细胞ellen möglich。小鼠自噬细胞增殖的刺激效应与夜间nachween有关。在实验中，我们观察了对乙酰胆碱和内皮素的影响。内皮素icam -1表达与PGRN在死亡中的调节weitergehendsollen RNA基础转录分析，刺激HUVECs einen genaueren Aufschluss <e:1>她的den parakrinen einuss PGRN aufend内皮素geen。
Methodik:Für die Untersuchungen wurden Plazenta-Explantkulturen aus Plazentagewebe von elektiv terminierten unauffälligen Schwangerschaften< 14+ 0 SSW post menstruationem verwendet. In diesem in-vitro Modell wurde Progranulin mittels Transduktion eines adenoviralen (Ad) Vektors gezielt überexprimiert. Eine erfolgreiche Transduktion erforderte im Vorfeld eine selektive Denudierung des Syncytiotrophoblasten durch vorsichtige Trypsinierung (0, 03%, 5 min). Die immunhistochemische Detektion von Ki-67 ermöglichte eine semiquantitative Beurteilung der Proliferation der villösen Zytotrophoblastzellen. Aus der Nabelschnur gesunder Termplazenten wurden primäre humane umbilikale venöse Endothelzellen (HUVECs) isoliert und über den Nachweis des von-Willebrand-Faktors immunhistochemisch charakterisiert. Zur Überprüfung parakriner Effekte erfolgte eine Inkubation der HUVECs mit konditioniertem Plazentaexplantmedium (30-u. 50% ig über 8 und 16h) und anschließenden Analysen zur Zytotoxizität und Viabilität sowie die Bestimmung von ICAM-1 und E-Selectin.Ergebnisse:Durch Ad Vektor-vermittelte Expression von PGRN konnte in den Kulturüberständen nach 72h eine signifikante Zunahme der PGRN-Konzentration gegenüber den Kontrollen gemessen werden (22 ng/ml vs. 350 ng/ml; P< 0,001). In diesem Zeitraum konnte durch den immunhistochemischen Nachweis einer E-Cadherin-negativen Zellschicht eine vollständige Regeneration des Syncytiotrophoblasten belegt werden. Die Behandlung der HUVECs mit konditioniertem Medium der Explantkulturen wirkte sich nicht auf die Vitalität und das Wachstum der Zellen aus. Nach 8h beziehungsweise 16h Inkubation zeigte sich in den Kontrollen eine leichte Zunahme der Expression von ICAM-1, die nach PGRN-Expression signifikant geringer ausfiel (1, 25 vs. 1, 06; P= 0,017). Unterschiede in der Expression von E-Selectin waren nicht festzustellen.Schlussfolgerung:Mithilfe des adenoviralen Gentransfers ist eine gezielte Überexpression des trophoblastären Progranulins in den villösen Trophoblastzellen möglich. Einen autokrinen proliferationsstimulierenden Effekt konnten wir nicht nachweisen. Im Gegensatz hierzu waren parakrine Effekte an Endothelzellen zu beobachten. Durch die Modulation der endothelialen ICAM-1-Expression greift PGRN in die Regulation der Endothelzellfunktion ein. Weitergehend sollen RNA basierte Transkriptomanalysen von stimulierten HUVECs einen genaueren Aufschluss über den parakrinen Einfluss von PGRN auf die Endothelzellen geben.