TORC1 promotes phosphorylation of ribosomal protein S6 via the AGC kinase Ypk3 in Saccharomyces cerevisiae.
TORC1 promotes phosphorylation of ribosomal protein S6 via the AGC kinase Ypk3 in Saccharomyces cerevisiae.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0120250
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Moustafa T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
González A;Shimobayashi M;Eisenberg T;Merle DA;Pendl T;Hall MN;Moustafa T
雷帕霉素复合物1（TORC 1）的目标是一个进化上保守的传感器的营养供应。在酵母酿酒酵母的遗传和药理学研究提供了机制的见解TORC 1信号调节响应营养。使用高度特异性的抗体，识别真正的TORC 1靶核糖体蛋白S6（Rps 6）在酵母中的磷酸化，我们发现，营养素迅速诱导Rps 6磷酸化的TORC 1依赖的方式。此外，我们证明，Ypk 3，AGC激酶表现出高度同源性的人S6激酶（S6 K），是所需的Rps 6在体内的磷酸化。Rps 6磷酸化在缺乏Ypk 3（ypk 3 Δ）的细胞中被完全消除，而先前报道为S6 K的酵母直系同源物的Sch 9对于Rps 6磷酸化是不稳定的。Ypk 3调控基序中的磷酸化缺陷突变消除了Rps 6磷酸化，并且与人S6激酶互补的ypk 3 Δ细胞以雷帕霉素敏感的方式恢复了Rps 6磷酸化。我们的研究结果表明，Ypk 3是TORC 1通路的关键组成部分，使用磷酸-S6特异性抗体提供了一个有价值的工具，以确定新的营养依赖性和雷帕霉素敏感的目标在体内。
The target of rapamycin complex 1 (TORC1) is an evolutionarily conserved sensor of nutrient availability. Genetic and pharmacological studies in the yeast Saccharomyces cerevisiae have provided mechanistic insights on the regulation of TORC1 signaling in response to nutrients. Using a highly specific antibody that recognizes phosphorylation of the bona fide TORC1 target ribosomal protein S6 (Rps6) in yeast, we found that nutrients rapidly induce Rps6 phosphorylation in a TORC1-dependent manner. Moreover, we demonstrate that Ypk3, an AGC kinase which exhibits high homology to human S6 kinase (S6K), is required for the phosphorylation of Rps6 in vivo. Rps6 phosphorylation is completely abolished in cells lacking Ypk3 (ypk3Δ), whereas Sch9, previously reported to be the yeast ortholog of S6K, is dispensable for Rps6 phosphorylation. Phosphorylation-deficient mutations in regulatory motifs of Ypk3 abrogate Rps6 phosphorylation, and complementation of ypk3Δ cells with human S6 kinase restores Rps6 phosphorylation in a rapamycin-sensitive manner. Our findings demonstrate that Ypk3 is a critical component of the TORC1 pathway and that the use of a phospho-S6 specific antibody offers a valuable tool to identify new nutrient-dependent and rapamycin-sensitive targets in vivo.
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