STORM Super-Resolution Imaging of CB1 Receptors in Tissue Preparations.
STORM Super-Resolution Imaging of CB1 Receptors in Tissue Preparations.
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组织制剂中 CB1 受体的 STORM 超分辨率成像。
DOI：
10.1007/978-1-0716-2728-0_36
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Katona,István
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zöldi,Miklós;Katona,István
单分子定位显微镜（SMLM）为研究分子分布的空间排列和疾病相关的再分布开辟了新的可能性，其分辨率前所未有，这是光学显微镜方法无法实现的。基于 SMLM 技术的最新发现揭示了多个生物系统（包括大脑中的化学突触）中信号蛋白的特定纳米级组织原理。新数据表明，内源性大麻素系统分子参与者的空间排列也在突触以及其他神经元和神经胶质亚细胞区室中的纳米级水平上受到精确调节。精确的纳米级分布模式可能对于以细胞类型和亚细胞域特异性方式维护这一重要信使系统的几种特定信号传导功能非常重要。随机光学重建显微镜 (STORM) 是一种特别适合细胞类型特异性纳米级分子成像的 SMLM 模式，因为它与传统的衍射极限显微镜方法和经典染色方法兼容。在这里，我们描述了小鼠脑组织样本中 STORMimaging 的详细协议，重点关注 CB1 大麻素受体，这是大脑中最丰富的突触受体之一。我们还总结了重要的概念和方法细节，这些细节对于有效解释单分子定位显微镜数据至关重要。
Single-molecule localization microscopy (SMLM) opened new possibilities to study the spatial arrangement of molecular distribution and disease-associated redistribution at a previously unprecedented resolution that was not achievable with optical microscopy approaches. Recent discoveries based on SMLM techniques uncovered specific nanoscale organizational principles of signaling proteins in several biological systems including the chemical synapses in the brain. Emerging data suggest that the spatial arrangement of the molecular players of the endocannabinoid system is also precisely regulated at the nanoscale level in synapses and in other neuronal and glial subcellular compartments. The precise nanoscale distribution pattern is likely to be important to subserve several specific signaling functions of this important messenger system in a cell-type- and subcellular domain-specific manner.STochastic Optical Reconstruction Microscopy (STORM) is an especially suitable SMLM modality for cell-type-specific nanoscale molecular imaging due to its compatibility with traditional diffraction-limited microscopy approaches and classical staining methods. Here, we describe a detailed protocol for STORMimaging in mouse brain tissue samples with a focus on the CB1cannabinoid receptor, one of the most abundant synaptic receptors in the brain. We also summarize important conceptual and methodical details that are essential for the valid interpretation of single-molecule localization microscopy data.
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