A strategy for the expression of recombinant proteins traditionally hard to purify.
A strategy for the expression of recombinant proteins traditionally hard to purify.
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DOI：
10.1016/j.ab.2012.07.016
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发表时间：
2012-10-15
影响因子：
2.9
通讯作者：
Woodgate R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Frank EG;McDonald JP;Karata K;Huston D;Woodgate R
我们已经开发了一系列质粒载体，用于可溶性表达和随后纯化重组蛋白，这些重组蛋白在历史上被证明是极难从大肠杆菌中纯化的。不是显著过量产生靶蛋白，而是以低基础水平表达，这有利于重组蛋白的正确折叠并增加其溶解度。传统上难以纯化的高活性重组蛋白易于使用标准亲和标签和常规色谱法纯化。为了证明这些载体的实用性，我们表达并纯化了来自大肠杆菌的全长人DNA聚合酶η、1和ν。大肠杆菌中的DNA聚合酶，并显示纯化的DNA聚合酶在体外具有催化活性。
We have developed a series of plasmid vectors for the soluble expression and subsequent purification of recombinant proteins that have historically proven to be extremely difficult to purify from Escherichia coli. Instead of dramatically overproducing the target protein, it is expressed at a low basal level that facilitates the correct folding of the recombinant protein and increases its solubility. Highly active recombinant proteins that are traditionally difficult to purify are readily purified using standard affinity tags and conventional chromatography. To demonstrate the utility of these vectors, we have expressed and purified full-length human DNA polymerases η, ι, and ν from E. coli and show that the purified DNA polymerases are catalytically active in vitro.
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影响因子：
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作者：
Karata, Kiyonobu;Vaisman, Alexandra;Goodman, Myron F.;Woodgate, Roger
通讯作者：
Woodgate, Roger
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