Characterization of a 2′,5′-Oligoadenylate (2–5A)-dependent 37-kDa RNase L
Characterization of a 2′,5′-Oligoadenylate (2–5A)-dependent 37-kDa RNase L
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2′,5′-寡腺苷酸 (2–5A) 依赖性 37-kDa RNase L 的表征
DOI：
--
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发表时间：
2001
影响因子：
4.8
通讯作者：
R. Suhadolnik
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Susan E. Shetzline;R. Suhadolnik
在慢性综合征患者外周血单个核细胞的提取液中发现了2‘，5’-寡腺苷(2-5A)合成酶/核糖核酸酶L途径关键成分的上调，其中包括一种低分子形式的核糖核酸酶L。在本研究中，我们分别利用光标记/免疫沉淀法和亲和分析方法完成了对2‘，5’-寡腺苷(2-5A)结合和激活80和37 kDa核糖核酸酶L的分析。用2-5A叠氮光探针[32P]pApAp(8-叠氮A)对80 kDa和37 kDa核糖核酸酶L进行了饱和光敏标记。[32P]pApAp(8-叠氮A)对80 kDa核糖核酸酶L和37 kDa核糖核酸酶L分别在3.7x10−8m和6.3x10−8m处出现半最大光插入。证明[32P]pApAp(8-叠氮A)能与80和37 kDa核糖核酸酶L的2-5A结合位点特异性结合。37 kDa核糖核酸酶L的水解率是80 kDa核糖核酸酶L的3倍。从这些2-5A结合和2-5A依赖的激活研究中获得的数据证实了[32P]pApAp(8-叠氮A)用于检测外周血单个核细胞提取液中37 kDa核糖核酸酶L的有效性。
Upregulation of key components of the 2′,5′-oligoadenylate (2–5A) synthetase/RNase L pathway have been identified in extracts of peripheral blood mononuclear cells from individuals with chronic syndrome, including the presence of a low molecular weight form of RNase L. In this study, analysis of 2′,5′-Oligoadenylate (2–5A) binding and activation of the 80- and 37-kDa forms of RNase L has been completed utilizing photolabeling/immunoprecipitation and affinity assays, respectively. Saturation of photolabeling of the 80- and the 37-kDa RNase L with the 2–5A azido photoprobe, [32P]pApAp(8-azidoA), was achieved. Half-maximal photoinsertion of [32P]pApAp(8-azidoA) occurred at 3.7 × 10−8 m for the 80-kDa RNase L and at 6.3 × 10−8 m for the 37-kDa RNase L. Competition experiments using 100-fold excess unlabeled 2–5A photoaffinity probe, pApAp(8-azidoA), and authentic 2–5A (p3A3) resulted in complete protection against photolabeling, demonstrating that [32P]pApAp(8-azidoA) binds specifically to the 2–5A-binding site of the 80- and 37-kDa RNase L. The rate of RNA hydrolysis by the 37-kDa RNase L was three times faster than the 80-kDa RNase L. The data obtained from these 2–5A binding and 2–5A-dependent activation studies demonstrate the utility of [32P]pApAp(8-azidoA) for the detection of the 37-kDa RNase L in peripheral blood mononuclear cell extracts.
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