Functional Reconstitution in Situ of 5-Hydroxytryptamine2c (5HT2c) Receptors with αq and Inverse Agonism of 5HT2c Receptor Antagonists*
Functional Reconstitution in Situ of 5-Hydroxytryptamine2c (5HT2c) Receptors with αq and Inverse Agonism of 5HT2c Receptor Antagonists*
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使用 αq 和 5HT2c 受体拮抗剂反向激动作用对 5-羟色胺2c (5HT2c) 受体进行原位功能重建*
DOI：
--
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发表时间：
1996
影响因子：
4.8
通讯作者：
J. Northup
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
J. L. Hartman;J. Northup
用含有大鼠5 HT 2c受体DNA的重组杆状病毒感染Sf 9细胞后制备的膜，但用野生型病毒感染后制备的膜，表达了125 I-麦角酸二乙基酰胺和[3 H]美舒麦角碱的高亲和力结合位点。受体位点密度在感染后60 h达到最适值50-70 pmol/mg膜蛋白。从核膜后部分中提取外周膜蛋白，6 M尿素耗尽GTPγ S结合4倍，而不降低5 HT 2c受体结合活性。表达5 HT 2c受体的尿素提取的Sf 9膜催化鱿鱼视网膜αq的活化，但不催化牛视网膜αt或牛αo/αi的活化。加入由牛脑或牛棒外节盘制备的βγ二聚体可增强5 HT 2c受体与鱿鱼αq的产生性相互作用。虽然5-羟色胺的加入增加了5 HT 2c受体催化的GTPγS与αq的结合，但未被占据的受体也具有催化活性。5 HT 2c受体拮抗剂，美舒麦角碱，米安色林，酮色林竞争性抑制5 HT激活的受体预测的排名顺序的亲和力;米安色林和酮色林显着抑制基础5 HT 2c受体活性。有趣的是，这种“反向激动剂”功效与5 HT 2c受体的拮抗剂亲和力无关。杆状病毒表达的5 HT 2c受体和尿素提取的postnuclear Sf 9细胞膜提供了一个高密度的原位，未偶联，G-蛋白连接的受体与纯化的G-蛋白亚基重建有用。这使得能够独立地操纵受体和G蛋白化学浓度，并且揭示了G蛋白连接的受体可以具有显著的基础催化活性，并且拮抗剂化合物可以在G蛋白的受体活化水平上充当该基础活性的反向激动剂。
Membranes prepared after infection of Sf9 cells with recombinant baculovirus containing the rat 5HT2c receptor DNA, but not after infection with wild-type virus, expressed high affinity binding sites for 125I-lysergic acid diethylamide and [3H]mesulergine. The receptor site density reached an optimum of 50-70 pmol/mg membrane protein at 60 h postinfection. Extraction of peripheral membrane proteins from the postnuclear membrane fraction with 6 M urea depleted GTPγS-binding 4-fold without decreasing 5HT2c receptor binding activity. Urea-extracted Sf9 membranes expressing the 5HT2c receptor catalyzed the activation of squid retinal αq but not bovine retinal αt or bovine αo/αi. Productive interaction of 5HT2c receptors with squid αq was enhanced by the addition of βγ dimers prepared from either bovine brain or bovine rod outer segment discs. While the addition of serotonin increased 5HT2c receptor-catalyzed GTPγS binding to αq, the unoccupied receptor was also catalytically active. The 5HT2c receptor antagonists, mesulergine, mianserin, and ketanserin competitively inhibited 5HT activation of the receptor with predicted rank-order affinities; and mianserin and ketanserin markedly inhibited basal 5HT2c receptor activity. Interestingly, this “inverse agonist” efficacy did not correlate with antagonist affinity for the 5HT2c receptor. Baculoviral expression of the 5HT2c receptor and urea extraction of postnuclear Sf9 cell membranes have provided a high density of in situ, uncoupled, G-protein-linked receptor useful for reconstitution with purified G-protein subunits. This has allowed for independent manipulation of receptor and G-protein chemical concentrations and has revealed that a G-protein-linked receptor can possess a significant basal catalytic activity and that antagonist compounds can act as inverse agonists of this basal activity at the level of receptor activation of G-proteins.
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DOI：
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发表时间：
1993-07
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
J. Hepler;T. Kozasa;A. Smrcka;Melvin I. Simon;S. Rhee;P. Sternweis;A. Gilman
通讯作者：
J. Hepler;T. Kozasa;A. Smrcka;Melvin I. Simon;S. Rhee;P. Sternweis;A. Gilman
DOI：
10.1073/pnas.83.11.4086
发表时间：
1986-06-01
影响因子：
11.1
作者：
CONN, PJ;SANDERSBUSH, E;HARTIG, PR
通讯作者：
HARTIG, PR
从杆状病毒感染的昆虫细胞中纯化出具有重组活性的 G 蛋白偶联受体。
DOI：
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发表时间：
1991
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Parker,EM;Kameyama,K;Higashijima,T;Ross,EM
通讯作者：
Ross,EM
Sf9 细胞重组 G16 α 的纯化和表征：G 蛋白 α 亚基激活纯化的磷脂酶 C 同工酶。
DOI：
10.1073/pnas.90.19.9176
发表时间：
1993
影响因子：
11.1
作者：
Kozasa,T;Hepler,JR;Smrcka,AV;Simon,MI;Rhee,SG;Sternweis,PC;Gilman,AG
通讯作者：
Gilman,AG
牛视网膜杆外节转导蛋白的表征。
DOI：
--
发表时间：
1983
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Fung,BK
通讯作者：
Fung,BK