Isolation, Characterization, And High Throughput Extracellular Flux Analysis of Mouse Primary Renal Tubular Epithelial Cells.
Isolation, Characterization, And High Throughput Extracellular Flux Analysis of Mouse Primary Renal Tubular Epithelial Cells.
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DOI：
10.3791/57718
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发表时间：
2018-06-20
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Shehadeh LA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ding W;Yousefi K;Shehadeh LA
肾小管上皮细胞 (TEC) 的线粒体功能障碍可导致肾纤维化，这是慢性肾病 (CKD) 的主要原因。因此，评估原代 TEC 中的线粒体功能可以为了解细胞的生物能状态提供有价值的见解，从而深入了解 CKD 的病理生理学。虽然有许多复杂的方案可用于分离和纯化不同物种的近端肾小管，但该领域缺乏一种针对肾小管细胞分离而无需纯化而优化的经济有效的方法。在这里，我们提供了一个分离方案，允许针对原代小鼠近端和远端肾脏 TEC 进行研究。除了该方案中所需的经济有效的试剂和最少的动物程序之外，分离的细胞在分离后保持高能量水平，并且可以传代培养最多四代，从而允许连续研究。此外，使用高通量细胞外通量分析仪，我们直接评估 96 孔板中分离的 TEC 中的线粒体呼吸，并为优化细胞密度和化合物浓度提供建议。这些观察结果表明，该方案可用于肾小管离体研究，并具有一致、标准化的肾 TEC 生产。该协议可能具有更广泛的未来应用，以研究与肾脏疾病相关的线粒体功能障碍，以用于药物发现或药物表征目的。
Mitochondrial dysfunction in the renal tubular epithelial cells (TECs) can lead to renal fibrosis, a major cause of chronic kidney disease (CKD). Therefore, assessing mitochondrial function in primary TECs may provide valuable insight into the bioenergetic status of the cells, providing insight into the pathophysiology of CKD. While there are a number of complex protocols available for the isolation and purification of proximal tubules in different species, the field lacks a cost-effective method optimized for tubular cell isolation without the need for purification. Here, we provide an isolation protocol that allows for studies focusing on both primary mouse proximal and distal renal TECs. In addition to cost-effective reagents and minimal animal procedures required in this protocol, the isolated cells maintain high energy levels after isolation and can be sub-cultured up to four passages, allowing for continuous studies. Furthermore, using a high throughput extracellular flux analyzer, we assess the mitochondrial respiration directly in the isolated TECs in a 96-well plate for which we provide recommendations for the optimization of cell density and compound concentration. These observations suggest that this protocol can be used for renal tubular ex vivo studies with a consistent, well-standardized production of renal TECs. This protocol may have broader future applications to study mitochondrial dysfunction associated with renal disorders for drug discovery or drug characterization purposes.
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影响因子：
5.6
作者：
Kamiyama M;Garner MK;Farragut KM;Kobori H
通讯作者：
Kobori H
影响因子：
5.3
作者：
Aschauer, Lydia;Gruber, Leonhard N.;Jennings, Paul
通讯作者：
Jennings, Paul
影响因子：
3.6
作者：
Elberg, Gerard;Guruswamy, Suresh;Turman, Martin A.
通讯作者：
Turman, Martin A.
影响因子：
3.7
作者：
George SK;Abolbashari M;Jackson JD;Aboushwareb T;Atala A;Yoo JJ
通讯作者：
Yoo JJ
DOI：
10.1152/ajprenal.1998.275.5.f651
发表时间：
1998-11-01
影响因子：
4.2
作者：
Rubera, I;Tauc, M;Poujeol, P
通讯作者：
Poujeol, P