Identification of Protein Kinase Cα as an Essential, but Not Sufficient, Cytosolic Factor for Ca2+-induced α- and Dense-core Granule Secretion in Platelets*
Identification of Protein Kinase Cα as an Essential, but Not Sufficient, Cytosolic Factor for Ca2+-induced α- and Dense-core Granule Secretion in Platelets*
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鉴定蛋白激酶 Cα 作为血小板中 Ca2+ 诱导的 α 和致密核心颗粒分泌的必需但非充分的胞质因子*
DOI：
10.1074/jbc.m102933200
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发表时间：
2001
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
H. Horiuchi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
A. Yoshioka;R. Shirakawa;H. Nishioka;A. Tabuchi;T. Higashi;H. Ozaki;A. Yamamoto;T. Kita;H. Horiuchi
激活后，血小板释放许多活性物质。在此，我们分析了Ca ~（2+）诱导透化人血小板α颗粒中储存的von Willebrand因子和致密核心颗粒中5-羟色胺分泌的机制。这两种分泌都依赖于ATP和胞浆。从大鼠脑胞液中分离纯化了两种颗粒分泌的必需因子，经部分氨基酸序列测定，确定为蛋白激酶Cα（PKCα）。纯化的PKCα在胞质溶胶存在下有效地刺激两种分泌，而单独的PKCα不支持任何类型的颗粒的分泌，表明PKCα不是一个足够的因子。最后，在人血小板胞液中，通过凝胶过滤柱分级，对致密核心颗粒分泌的刺激活性与PKC的浓度相关，提示PKC也可能是血小板胞液中的这种刺激因子。因此，我们确定PKCα是Ca 2+诱导的血小板α-颗粒和致密核心颗粒分泌的一个必需的，但不是足够的胞质因子。
Upon activation, platelets release many active substances. Here, we have analyzed the mechanism governing Ca2+-induced secretion of von Willebrand factor stored in α-granules and 5-hydroxytryptamine in dense-core granules in permeabilized human platelets. Both secretions were dependent on ATP and cytosol. An essential factor for both granule secretions was purified from rat brain cytosol and identified to be protein kinase Cα (PKCα) by partial amino acid sequencing. Purified PKCα efficiently stimulated both secretions in the presence of cytosol, whereas PKCα alone did not support the secretion of either type of granules, suggesting that PKCα is not a sufficient factor. Finally, in human platelet cytosol fractionated by a gel filtration column, the stimulatory activity for dense-core granule secretion paralleled with the concentration of PKC, suggesting that PKC could also be such a stimulatory factor in platelet cytosol. Thus, we identified PKCα as an essential, but not sufficient, cytosolic factor for the Ca2+-induced secretions of both α- and dense-core granules in platelets.
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