SIRT1对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控
SIRT1对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控
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DOI：
10.3760/cma.j.cn115909-20210702-00259
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
闫东升
中科院分区：
文献类型：
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作者：
林永;李丽;刘琦;闫东升
目的:探讨沉默信息调节蛋白1 (SIRT1)对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法:实验研究。通过定量PCR和Western blot法检测SIRT1在葡萄膜黑色素瘤细胞(M23和SP6.5)和正常人葡萄膜黑色素细胞(DM78、UM95和UM96)中的表达。在葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中,用EX527抑制SIRT1活性,以溶剂DMSO作为阴性对照组;用SIRT1小干扰RNA(siSIRTl)转染细胞抑制SIRT1表达,以无义小干扰RNA(NC)转染作为阴性对照组。细胞增殖实验(MTS)、流式细胞术、平板克隆形成实验分别检测细胞活性、细胞周期以及细胞克隆形成能力。裸鼠眼内成瘤实验检测葡萄膜黑色素瘤细胞眼内成瘤能力。Western blot法检测增殖相关蛋白。组间数据均采用独立样本t检验进行比较。结果:与葡萄膜黑色素细胞相比,葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中SIRT1 mRNA (t=17.08, P<0.001;t=13.24, P<0.001)和蛋白(t=6.26,P=0.008)表达水平显著升高。MTS结果显示,EX527抑制M23和SP6.5细胞活性,并呈药物浓度依赖性;与NC转染组相比,siSIRTl转染组细胞活性显著减弱(t=5.94,P<0.001;t=10.73, P<0.001)。与溶剂DMSO组相比,EX527处理组(t=5.10,P=0.047;t=7.57, P=0.002)和SIRT1 siRNA转染组(t=6.41,P=0.003; t=6.10, P=0.004)中处于G1期的细胞比例均显著升高。另外,M23和SP6.5细胞EX527处理组(t=5.04, P=0.001;t=5.93, P<0.001)和siSIRT1转染组(t=11.44, P<0.001;t=8.24, P<0.001)克隆形成数量显著降低。在裸鼠眼内成瘤实验中,与NC组相比,siSIRTl转染组眼内瘤体大小显著变小(t=5.50,P<0.001)。Western blot结果显示,与DMSO处理组相比,EX527处理组中P21 (t=4.63, P=0.010;t=7.90, P=0.001)表达升高,E2F1 (t=12.10,P=0.003;t=5.96,P=0.004)、CYCLIND2(t=36.28,P<0.001;t=16.58, P<0.001)、p-RB(t=17.55,P<0.001;t=21.34, P<0.001)表达降低,p-AKT表达下调。与NC转染组相比,siSIRTl转染组中,P21 (t=5.88,P=0.004;t=10.51, P<0.001)表达升高,E2F1 (t=4.60, P=0.01; t=4.89, P=0.008)、CYCLIND2 (t=5.13,P=0.007;t=5.63,P=0.005)、p-RB(t=4.45, P=0.011;t=6.53,P=0.003)表达水平降低,p-AKT(t=9.61,P<0.001;t=6.44, P=0.003)表达下调。结论:抑制SIRT1活性或表达可以明显抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖,提示SIRT1可以作为治疗葡萄膜黑色素瘤的一个新靶标。