SARS_CoV2 RBD gene transcription cannot be driven by CMV promoter.
SARS_CoV2 RBD gene transcription cannot be driven by CMV promoter.
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DOI：
10.1016/j.virol.2021.02.010
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发表时间：
2021-06
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Li Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Xie L;Yi K;Li Y
巨细胞病毒 (CMV) 启动子驱动各种基因表达并产生足够的蛋白质用于进一步的功能研究。 SARS_CoV2刺突蛋白上的受体结合域（RBD）是病毒感染最关键的门户。因此，天然构象RBD蛋白可能有助于RBD的生化鉴定，并为治疗COVID-19的药物和疫苗设计提供有价值的支持。我们尝试在CMV启动子下体外表达RBD，但失败了。在用重组质粒转染的细胞中无法检测到 RBD 特异性 mRNA，其中 CMV 启动子控制 RBD 转录。此外，pCMV-Tag2B-SARS_CoV2_RBD 反式使 CMV 启动子转录活性失活。另外，我们发现鸡 β-肌动蛋白启动子和牛痘病毒特异性中/晚期 (M/L) 启动子 (pSYN) 都可以高度先于 SARS_CoV2 RBD 表达。我们的研究结果证明SARS_CoV2 RBD基因可以由鸡β-肌动蛋白启动子或牛痘病毒特异性中/晚期启动子而不是CMV启动子驱动，从而为RBD特征探索提供有价值的信息。
Cytomegalovirus (CMV) promoter drives various gene expression and yields sufficient protein for further functional investigation. Receptor binding domain (RBD) on spike protein of the SARS_CoV2 is the most critical portal for virus infection. Thus native conformational RBD protein may facilitate biochemical identification of RBD and provide valuable support of drug and vaccine design for curing COVID-19. We attempted to express RBD under CMV promoter in vitro, but failed. RBD-specific mRNA cannot be detected in cell transfected with recombinant plasmids, in which CMV promoter governs the RBD transcription. Additionally, the pCMV-Tag2B-SARS_CoV2_RBD trans-inactivates CMV promoter transcription activity. Alternatively, we identified that both Chicken β-actin promoter and Vaccinia virus-specific medium/late (M/L) promoter (pSYN) can highly precede SARS_CoV2 RBD expression. Our findings provided evidence that SARS_CoV2 RBD gene can be driven by Chicken β-actin promoter or Vaccinia virus-specific medium/late promoter instead of CMV promoter, thus providing valuable information for RBD feature exploration.
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