NLS peptide conjugated molecular beacons for visualizing nuclear RNA in living cells.
NLS peptide conjugated molecular beacons for visualizing nuclear RNA in living cells.
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DOI：
10.1021/bc800322a
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发表时间：
2008-11-19
影响因子：
4.7
通讯作者：
Bao, Gang
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nitin, Nitin;Bao, Gang
对活细胞核中 RNA 的表达和定位进行成像可以提供有关 RNA 合成、加工和运输的重要信息。在此，我们报告了双功能分子信标 (NLS-MB) 的开发，该双功能分子信标 (NLS-MB) 由与分子信标缀合的单个核定位序列 (NLS) 肽组成，用于活细胞核中内源 RNA 的有效递送和成像。我们通过将 NLS-MB 的信噪比与未修饰的分子信标进行比较来表征 NLS-MB，并确定其核输入效率。我们通过在活细胞中观察小核 RNA (snRNA) U1 和 U2 在核质中离散焦点的定位和共定位，以及小核仁 RNA U3 在核仁中的定位，证明了该方法的特异性和敏感性。选择这些 snRNA 是因为它们在 RNA 生物发生中发挥重要作用。使用原位杂交作为阳性对照和随机信标作为阴性对照来验证结果。这种新方法可应用于活细胞中其他核 RNA 和前 mRNA 的成像。
Imaging the expression and localization of RNAs in live-cell nucleus can provide important information on RNA synthesis, processing and transport. Here we report the development of a bi-functional molecular beacon (NLS-MB) composed of a single nuclear localization sequence (NLS) peptide conjugated to a molecular beacon for efficient delivery and imaging of endogenous RNAs in the nuclei of living cells. We characterized the NLS-MBs by comparing their signal to noise ratios with unmodified molecular beacons and determined their efficiency of nuclear import. We demonstrated the specificity and sensitivity of the method by observing in living cells the localization and co-localization of small nuclear RNAs (snRNA) U1 and U2 at discrete foci in the nucleoplasm, and the localization of small nucleolar RNA U3 in the nucleolus. These snRNAs were chosen because of their essential roles in RNA biogenesis. The results were validated using in situ hybridization as positive control and random beacons as negative control. This novel approach may be applied to imaging other nuclear RNAs and pre-mRNAs in living cells.
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影响因子：
7.8
作者：
MATERA, AG;WARD, DC
通讯作者：
WARD, DC
DOI：
10.1073/pnas.2233244100
发表时间：
2003-11-11
影响因子：
11.1
作者：
Bratu, DP;Cha, BJ;Tyagi, S
通讯作者：
Tyagi, S
影响因子：
64.8
作者：
Dragon, F;Gallagher, JEG;Baserga, SJ
通讯作者：
Baserga, SJ
影响因子：
3.3
作者：
MATERA, AG;TYCOWSKI, KT;WARD, DC
通讯作者：
WARD, DC
影响因子：
11.4
作者：
CARMOFONSECA, M;PEPPERKOK, R;LAMOND, AI
通讯作者：
LAMOND, AI