RNA Live Imaging in the Model Microorganism Ustilago maydis.

RNA Live Imaging in the Model Microorganism Ustilago maydis.
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模型微生物玉米黑粉菌的 RNA 实时成像

DOI:
10.1007/978-1-4939-7213-5_21
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发表时间:
2018
影响因子:
--
通讯作者:
M. Feldbrügge
M. Feldbrügge
中科院分区:
--
文献类型:
--
作者:
S. Zander;K. Müntjes;M. Feldbrügge

文献摘要

参考文献

被引文献

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蛋白质表达的一个基本特征是对蛋白质何时何地从其同源mRNA翻译的严格调控。这种时空表达对于确保蛋白质正确和有效地定位于特定的亚细胞位置尤为重要。为了实现本地翻译,必须将mRNAs存放在特定位置。一种常见的机制是沿着肌动蛋白或微管细胞骨架主动运输mRNAs。要在体内研究这种动态转运过程,RNA活体成像是一种选择的方法。该方法的原理是将定义的异源RNA结合蛋白(RBP)结合位点插入到目标mRNAs的3‘UTR区。RBP与荧光蛋白的融合共表达使利用荧光显微镜技术在体内检测mRNA成为可能。在这一章中,我们描述了在真核模型微生物玉米黑粉菌中研究微管依赖的mRNA运输的成熟方法。所提出的实验设计和显微技术可广泛应用于其他生物。
An essential feature of protein expression is the tight regulation of when and where a protein is translated from its cognate mRNA. This spatiotemporal expression is particularly important in guaranteeing the correct and efficient targeting of proteins to defined subcellular sites. In order to achieve local translation, mRNAs must be deposited at specific locations. A common mechanism is the active transport of mRNAs along the actin or microtubule cytoskeleton. To study such dynamic transport processes in vivo RNA live imaging is the method of choice. This method is based on the principle that defined binding sites for a heterologous RNA-binding protein (RBP) are inserted in the 3′ UTR of target mRNAs. Coexpression of the RBP fused to a fluorescent protein enables mRNA detection in vivo using fluorescence microscopy techniques. In this chapter we describe the well-established method of studying microtubule-dependent mRNA transport in the eukaryotic model microorganismUstilago maydis. The presented experimental design and the microscopic techniques are applicable to a broad range of other organisms.
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