髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析
髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析
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DOI：
10.3969/j.issn.1000-484x.2022.05.013
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
葛志强
中科院分区：
文献类型：
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作者：
李亚婷;张洁;尹荣华;杨晓明;任广明;葛志强
目的:构建髓系特异性Abro1(Abraxas brother 1)基因敲除小鼠,并初步分析其对小鼠造血系统及LPS诱导败血症的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre/LoxP重组系统构建Abro1~(flox/+)小鼠,将Abro1~(flox/+)雌雄小鼠自交,子代得到Abro1~(flox/flox)基因型小鼠。Abro1~(flox/flox)与Lyz2-Cre~+小鼠交配,子代得到Abro1~(flox/+)/Lyz2-Cre~+小鼠,再将其与Abro1~(flox/flox)交配,最终得到的Abro1~(flox/flox)/Lyz2-Cre~+小鼠为髓系特异性Abro1基因敲除小鼠,即MKO小鼠;Abro1~(flox/flox)/Lyz2-Cre~-小鼠作为野生型小鼠,即WT小鼠。提取WT和MKO小鼠尾基因组DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型。提取WT和MKO小鼠免疫细胞蛋白, Western blot检测ABRO1蛋白表达。流式细胞术分析小鼠骨髓和外周血免疫细胞组成,检测MKO小鼠对造血系统的影响。 LPS处理WT和MKO小鼠3 h,检测血清中相关生化指标变化以及炎症因子分泌情况。结果:PCR和Western blot结果显示髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建成功。流式细胞术结果显示WT和MKO小鼠骨髓和外周血中髓系细胞(CD11b~+ 、 CD11b~+Ly6G~+、CD11b~+Ly6C~+)和淋巴细胞组成(CD3~+、B220~+)无差异。LPS诱导败血症实验中,MKO小鼠相关生化指标和炎症因子水平均低于WT小鼠,表明MKO小鼠可抵抗LPS诱导的败血症。结论:成功构建ABRO1 MKO敲除小鼠,发现MKO小鼠造血系统正常,但可抵抗LPS诱导的败血症,ABRO1 MKO小鼠的建立为揭示ABRO1在免疫细胞亚群中的差异性调控机制提供了良好的动物模型。