Ordered and dynamic assembly of single spliceosomes.
Ordered and dynamic assembly of single spliceosomes.
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DOI：
10.1126/science.1198830
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发表时间：
2011-03-11
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Moore MJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hoskins AA;Friedman LJ;Gallagher SS;Crawford DJ;Anderson EG;Wombacher R;Ramirez N;Cornish VW;Gelles J;Moore MJ
剪接体是一种复杂的大分子机器，负责将内含子从mRNAs前体(前mRNAs)中移除。我们将酵母基因工程、化学生物学和多波长荧光显微镜相结合，实时跟踪单个剪接体在全细胞提取液中的组装。我们发现，单个剪接体亚复合体通过有序的途径与前信使核糖核酸相继结合，从而产生功能剪接体，并且每个亚复合体之间的结合是可逆的。此外，早期的亚复杂结合事件并不完全使前-mRNA剪接，而是随着组装的进行而增加。这些发现对选择性剪接的调控具有重要意义。这一实验策略应该被证明广泛适用于接近活细胞复杂性的环境中的其他大分子机器的机械分析。
The spliceosome is the complex macromolecular machine responsible for removing introns from precursors to mRNAs (pre-mRNAs). We combined yeast genetic engineering, chemical biology, and multi-wavelength fluoresence microscopy to follow assembly of single spliceosomes in real time in whole cell extracts. We find that individual spliceosomal subcomplexes associate with pre-mRNA sequentially via an ordered pathway to yield functional spliceosomes, and that association of every subcomplex is reversible. Further, early subcomplex binding events do not fully commit a pre-mRNA to splicing; rather commitment increases as assembly proceeds. These findings have important implications for the regulation of alternative splicing. This experimental strategy should prove widely useful for mechanistic analysis of other macromolecular machines in environments approaching the complexity of living cells.
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