Long-term reduction of T-cell intracellular antigens leads to increased beta-actin expression.
Long-term reduction of T-cell intracellular antigens leads to increased beta-actin expression.
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DOI：
10.1186/1476-4598-13-90
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发表时间：
2014-04-27
期刊：
影响因子：
37.3
通讯作者：
Izquierdo JM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Carrascoso I;Sánchez-Jiménez C;Izquierdo JM
HeLa细胞中T细胞胞内抗原（TIA）蛋白的永久性下调表达改善了细胞因子介导的功能，例如细胞增殖和肿瘤生长。利用T细胞胞内抗原1（TIA 1）和/或TIA 1相关/类似物表达被敲低/敲除的人和小鼠细胞（TIAR/TIAL 1）蛋白和经典RNA（例如逆转录-定量聚合酶链反应、使用蔗糖梯度的多聚体谱分析、免疫印迹、免疫沉淀、电泳迁移率变动测定，紫外光交联和聚（A+）测试分析）和细胞生物学方法（例如免疫荧光显微镜和quimeric mRNA转染），我们分析了TIA蛋白在β-肌动蛋白（ACTB）mRNA转录后调节中的调节作用。我们的观察表明，上述细胞能力的获得是伴随着肌动蛋白β亚基（ACTB）蛋白表达水平的增加。调节TIA丰度不改变ACTB mRNA水平，然而，观察到ACTB mRNA翻译增加。TIA蛋白的这种调节能力与ACTB mRNA 3′-非翻译区（3′-UTR）有关，在那里这些蛋白可以作为RNA结合蛋白发挥作用。来自含有人ACTB 3′-UTR的嵌合报告基因的GFP表达重现了在不存在TIA蛋白的情况下由内源ACTB mRNA发现的翻译控制。此外，与对照相比，TIA 1敲除的鼠胚胎成纤维细胞（MEF）增加小鼠ACTB蛋白表达。小鼠ACTB mRNA的稳态水平再次保持不变。总的来说，这些结果表明TIA蛋白可以在小鼠和人细胞中作为ACTB mRNA代谢的长期调节剂发挥作用。
The permanent down-regulated expression of T-cell intracellular antigen (TIA) proteins in HeLa cells improves cytoskeleton-mediated functions such as cell proliferation and tumor growth. Making use of human and mouse cells with knocked down/out expression of T-cell intracellular antigen 1 (TIA1) and/or TIA1 related/like (TIAR/TIAL1) proteins and classical RNA (e.g. reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, polysomal profiling analysis using sucrose gradients, immunoblotting, immunoprecipitation, electrophoretic mobility shift assays, ultraviolet light crosslinking and poly (A+) test analysis) and cellular (e.g. immunofluorescence microscopy and quimeric mRNA transfections) biology methods, we have analyzed the regulatory role of TIA proteins in the post-transcriptional modulation of beta-actin (ACTB) mRNA. Our observations show that the acquisition of above cellular capacities is concomitant with increased expression levels of the actin beta subunit (ACTB) protein. Regulating TIA abundance does not modify ACTB mRNA levels, however, an increase of ACTB mRNA translation is observed. This regulatory capacity of TIA proteins is linked to the ACTB mRNA 3′-untranslated region (3′-UTR), where these proteins could function as RNA binding proteins. The expression of GFP from a chimeric reporter containing human ΑCΤΒ 3′-UTR recapitulates the translational control found by the endogenous ACTB mRNA in the absence of TIA proteins. Additionally, murine embryonic fibroblasts (MEF) knocked out for TIA1 rise mouse ACTB protein expression compared to the controls. Once again steady-state levels of mouse ACTB mRNA remained unchanged. Collectively, these results suggest that TIA proteins can function as long-term regulators of the ACTB mRNA metabolism in mouse and human cells.
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