Force-induced motions of the PIEZO1 blade probed with fluorimetry.
Force-induced motions of the PIEZO1 blade probed with fluorimetry.
复制标题
使用荧光测定法探测 PIEZO1 叶片的力引起运动。
DOI：
10.1016/j.celrep.2023.112837
复制
发表时间：
2023-08-29
期刊：
影响因子：
8.8
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
机械力被认为通过改变大的跨膜叶片结构域的构象来激活机械敏感性PIEZO通道。然而，是否不同的刺激诱导相同的构象变化在这个领域仍然不清楚。在这里，我们重新利用环状排列的绿色荧光蛋白作为构象敏感的探针，以跟踪局部重排沿着PIEZO 1刀片。两个独立的探针，一个插入在细胞外的网站远孔和其他在一个遥远的细胞内近端位置，引发相当大的荧光信号时，标记的通道激活响应低强度的流体剪切应力。无论是细胞的压痕，也不渗透肿胀的细胞引起可检测的荧光信号从任何探针，尽管这些刺激的能力，激活标记的通道。高强度流动刺激在从任一探针引出荧光信号方面是无效的。总之，这些发现表明，低强度流体剪切应力导致细胞的机械应力的独特形式。Ozkan等人使用构象敏感的荧光探针来追踪PIEZO 1的机械感觉叶片结构域的力诱导的重排。两个探针分别插入叶片中，当通道响应于低强度流体剪切应力而不是其他测试的机械刺激而激活时，它们独立地“点亮”。
Mechanical forces are thought to activate mechanosensitive PIEZO channels by changing the conformation of a large transmembrane blade domain. Yet, whether different stimuli induce identical conformational changes in this domain remains unclear. Here, we repurpose a cyclic permuted green fluorescent protein as a conformation-sensitive probe to track local rearrangements along the PIEZO1 blade. Two independent probes, one inserted in an extracellular site distal to the pore and the other in a distant intracellular proximal position, elicit sizable fluorescence signals when the tagged channels activate in response to fluid shear stress of low intensity. Neither cellular indentations nor osmotic swelling of the cell elicit detectable fluorescence signals from either probe, despite the ability of these stimuli to activate the tagged channels. High-intensity flow stimuli are ineffective at eliciting fluorescence signals from either probe. Together, these findings suggest that low-intensity fluid shear stress causes a distinct form of mechanical stress to the cell. Ozkan et al. use conformation-sensitive fluorescent probes to track force-induced rearrangements of PIEZO1’s mechanosensory blade domains. Two probes inserted far apart in the blade independently “light up” as channels activate in response to low-intensity fluid shear stress but not to other tested mechanical stimuli.
登录
查看更多内容
影响因子：
13.6
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
16.6
作者：
Cox CD;Bae C;Ziegler L;Hartley S;Nikolova-Krstevski V;Rohde PR;Ng CA;Sachs F;Gottlieb PA;Martinac B
通讯作者：
Martinac B
用于体内内源性大麻素动态时空分辨成像的荧光传感器
影响因子：
46.9
作者：
Dong, Ao;He, Kaikai;Dudok, Barna;Farrell, Jordan S.;Guan, Wuqiang;Liput, Daniel J.;Puhl, Henry L.;Cai, Ruyi;Wang, Huan;Duan, Jiali;Albarran, Eddy;Ding, Jun;Lovinger, David M.;Li, Bo;Soltesz, Ivan;Li, Yulong
通讯作者：
Li, Yulong
影响因子：
5.9
作者：
Ellefsen, Kyle L.;Holt, Jesse R.;Pathak, Medha M.
通讯作者：
Pathak, Medha M.
影响因子：
3.4
作者：
Buyan, Amanda;Cox, Charles D.;Corry, Ben
通讯作者：
Corry, Ben