Enrichment of Na+-Ca2+ exchange in cardiac sarcolemmal vesicles by alkaline extraction.
Enrichment of Na+-Ca2+ exchange in cardiac sarcolemmal vesicles by alkaline extraction.
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通过碱提取富集心脏肌膜囊泡中的 Na -Ca2 交换。
DOI：
10.1016/0005-2736(87)90239-2
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发表时间：
1987
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Ward,R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Philipson,KD;McDonough,AA;Frank,JS;Ward,R
将犬心脏肌膜囊泡暴露于碱性介质（⩾ pH 12）中会提取出 33% 的蛋白质。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示特定蛋白质被溶解。离心后，大部分磷脂和唾液酸保留在沉淀中。电子显微镜显示，碱处理不会对囊泡造成严重的形态学损伤，尽管冷冻断裂表明膜内颗粒有一些聚集。数据表明，高 pH 值可能会去除外周蛋白质，而将完整蛋白质留在原处。我们发现碱提取膜在溶解和重构后 Na+-Ca2+ 交换活性完全恢复。这些囊泡仅含有从对照肌膜重建的囊泡的 50% 的蛋白质。因此，Na+-Ca2+交换的比活性加倍。碱提取是一种有用且可重复的富集 Na+-Ca2+ 交换蛋白的方法。尽管免疫检测显示 (Na++ K+)-ATPase 蛋白未被提取，但 NNa++ K+)-ATPase 因暴露于 pH 12 介质而完全失活。我们检测到 (Na++ K+)-ATP 酶的 α 和 α+ 形式，并推断 Na+泵蛋白不构成肌膜蛋白的主要部分。
Exposure of canine cardiac sarcolemmal vesicles to alkaline media (⩾ pH 12) results in the extraction of 33% of the protein. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis shows that specific proteins are being solubilized. Most of the phospholipid and sialic acid remains with the pellet after centrifugation. Electron microscopy reveals that alkaline treatment does not cause gross morphological damage to the vesicles, although freeze-fracture demonstrates some aggregation of intramembrane particles. The data indicate that high pH probably removes peripheral proteins and leaves the integral proteins in place. We find complete recovery of Na+-Ca2+exchange activity in alkaline-extracted membranes after solubilization and reconstitution. These vesicles contain only 50% of the protein of vesicles reconstituted from control sarcolemma. Thus, the specific activity of Na+-Ca2+exchange is doubled. Alkaline extraction is a useful and reproducible procedure for enrichment of the Na+-Ca2+exchange protein. NNa++ K+)-ATPase is completely inactivated by exposure to pH 12 medium though immunodetection shows that the (Na++ K+)-ATPase proteins are not extracted. We detect both α andα+ forms of (Na++ K+)-ATPase and deduce that the Na+pump proteins do not comprise a major fraction of sarcolemmal protein.
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从鸡心脏质膜中部分纯化 Na -Ca2 逆向转运蛋白。
DOI：
10.1016/0005-2736(82)90478-3
发表时间：
1982
期刊：
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影响因子：
--
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通讯作者：
K. Goshima
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DOI：
--
发表时间：
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期刊：
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--
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McDonough,AA
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4.8
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通讯作者：
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--
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L. Andersson
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发表时间：
1984
期刊：
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影响因子：
--
作者：
A. McDonough
通讯作者：
A. McDonough