Identification and Characterization of Human DNA Polymerase β2, a DNA Polymerase β-Related Enzyme*
Identification and Characterization of Human DNA Polymerase β2, a DNA Polymerase β-Related Enzyme*
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人类 DNA 聚合酶 β2（一种 DNA 聚合酶 β 相关酶）的鉴定和表征*
DOI：
--
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发表时间：
2000
影响因子：
4.8
通讯作者：
M. Nakanishi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
K. Nagasawa;K. Kitamura;A. Yasui;Y. Nimura;K. Ikeda;M. Hirai;A. Matsukage;M. Nakanishi
BRCA1 COOH末端(BRCT)基序存在于许多核蛋白中，参与细胞周期调节或DNA修复。通过使用针对brct基序的简并引物进行聚合酶链式反应筛选，获得了一个与ββ(POLβ)密切相关的未知聚合酶的cDNAs。预测的POLβ2蛋白在其氨基末端含有一个BRCT基序；其COOH端与人POLβ的相应区域有33%的序列同源性。POLβ2基因以组织特异性的方式表达，转录本在睾丸中含量最高。由POL-β-2和绿色荧光蛋白组成的融合载体在转染的HeLa细胞中表现出主要的核定位。从昆虫细胞中提取的重组人Pol-β-2具有较强的DNA聚合酶活性，但不具有末端脱氧核糖核苷酸转移酶活性。缺失BRCT基序的POLβ2突变株保持了较高的聚合酶活性，而突变株POLβ2在DNA聚合酶活性部位有两个丙氨酸点突变则没有。这些结果表明，POLβ2是一种与POLβ相关的DNA聚合酶，其BRCT基序对于其聚合酶活性是必不可少的。
The BRCA1 COOH terminus (BRCT) motif is present in many nuclear proteins that contribute to cell cycle regulation or DNA repair. Polymerase chain reaction-based screening with degenerate primers targeted to the BRCT motif resulted in the isolation of a human cDNA for a previously unidentified DNA polymerase (designated DNA polymerase β2) that is closely related to DNA polymerase β (Pol β). The predicted Pol β2 protein contains a BRCT motif in its NH2-terminal region; its COOH-terminal region exhibits 33% sequence identity to a corresponding region of human Pol β. The Pol β2 gene is expressed in a tissue-specific manner, with transcripts being most abundant in testis. A fusion construct comprising Pol β2 and green fluorescent protein exhibited a predominantly nuclear localization in transfected HeLa cells. Recombinant human Pol β2 from insect cells exhibited substantial DNA polymerase activity, but it did not possess terminal deoxyribonucleotidyl transferase activity. A truncated Pol β2 mutant lacking the BRCT motif retained substantial DNA polymerase activity, whereas a mutant Pol β2 with two alanine point mutations within the DNA polymerase active site did not. These results indicate that Pol β2 is a Pol β-related DNA polymerase with a BRCT motif that is dispensable for its polymerase activity.
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