Immunofluorescence Microscopy
Immunofluorescence Microscopy
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免疫荧光显微镜
DOI：
10.1002/cpz1.842
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Asai, David J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Galati, Domenico F.;Asai, David J.
可视化荧光标记分子是一种强大的策略，可以揭示细胞的复杂动态。一种强大且广泛适用的方法是免疫荧光显微镜，其中荧光标记的抗体结合感兴趣的分子，然后通过荧光显微镜确定抗体的位置。该技术的有效应用包括几个考虑因素，例如抗原的性质、抗体的特异性、标本的透化和固定以及细胞的荧光成像。尽管每个方案都需要根据细胞类型、抗体和抗原进行微调，但几乎所有应用都有共同的步骤。本文提供了对两种截然不同的细胞进行细胞骨架和细胞器染色的方案：扁平的、贴壁的成纤维细胞和厚的、自由游动的四膜虫细胞。其他协议可通过宽场、激光扫描共焦和 eSRRF 超分辨率荧光显微镜进行可视化。 © 2023 Wiley periodicals LLC. 基本方案 1：对成纤维细胞等贴壁细胞进行免疫荧光染色基本方案 2：对四膜虫等悬浮细胞进行免疫荧光染色基本方案 3：使用宽场荧光显微镜观察样品替代方案 1：对粘附在聚 L-赖氨酸包被盖玻片上的悬浮细胞进行染色替代方案 2：使用激光扫描共焦观察样品显微镜替代方案 3：使用 SRRF 显微镜生成超分辨率图像
Visualizing fluorescence‐tagged molecules is a powerful strategy that can reveal the complex dynamics of the cell. One robust and broadly applicable method is immunofluorescence microscopy, in which a fluorescence‐labeled antibody binds the molecule of interest and then the location of the antibody is determined by fluorescence microscopy. The effective application of this technique includes several considerations, such as the nature of the antigen, specificity of the antibody, permeabilization and fixation of the specimen, and fluorescence imaging of the cell. Although each protocol will require fine‐tuning depending on the cell type, antibody, and antigen, there are steps common to nearly all applications. This article provides protocols for staining the cytoskeleton and organelles in two very different kinds of cells: flat, adherent fibroblasts and thick, free‐swimmingTetrahymenacells. Additional protocols enable visualization with widefield, laser scanning confocal, and eSRRF super‐resolution fluorescence microscopy. © 2023 Wiley Periodicals LLC.Basic Protocol 1: Immunofluorescence staining of adherent cells such as fibroblastsBasic Protocol 2: Immunofluorescence of suspension cells such asTetrahymenaBasic Protocol 3: Visualizing samples with a widefield fluorescence microscopeAlternate Protocol 1: Staining suspension cells adhered to poly‐l‐lysine‐coated coverslipsAlternate Protocol 2: Visualizing samples with a laser scanning confocal microscopeAlternate Protocol 3: Generating super‐resolution images with SRRF microscopy
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