Ubiquitination of GPCRs.
Ubiquitination of GPCRs.
复制标题
GPCR 的泛素化。
DOI：
10.1007/978-1-61779-126-0_13
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发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
Marchese,Adriano
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Caballero,Adriana;Marchese,Adriano
在本章中，我们描述了一种检测G蛋白偶联受体（GPCRs）的泛素化状态的方法。这涉及GPCR与表位标记的泛素构建体在异源哺乳动物表达系统中的共表达。通过免疫沉淀和随后的免疫印迹检测泛素对GPCR的刺激依赖性修饰，以检测表位标记的泛素的掺入。我们在这里描述了一个完善的协议来检测趋化因子受体CXCR4的泛素化，它可以很容易地应用于检测其他GPCR的泛素化状态。
In this chapter, we describe a method for detecting the ubiquitination status of G protein-coupled receptors (GPCRs). This involves co-expression of a GPCR with an epitope-tagged ubiquitin construct in a heterologous mammalian expression system. Stimulus-dependent modification of the GPCR by ubiquitin is detected by immunoprecipitation and subsequent immunoblotting to detect incorporation of the epitope-tagged ubiquitin. We describe here a well-established protocol to detect ubiquitination of the chemokine receptor CXCR4, which can be easily applied to detect the ubiquitination status of other GPCRs.