基于高分辨率熔解曲线技术的 CRISPR/Cas9 介导的细胞基因突变快速检测研究
基于高分辨率熔解曲线技术的 CRISPR/Cas9 介导的细胞基因突变快速检测研究
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DOI：
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-1477
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
何志旭
中科院分区：
文献类型：
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作者：
陈黎;卢茜;杨红兰;张鹏;何志旭
旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线（high-resolution melting，HRM）分析技术快速检测 CRISPR/Cas9 介导的细胞.基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善 HRM 检测条件，然后应用建立的 HRM 方法对 30.个测序结果已知的 CRISPR/Cas9 技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测，根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯.合突变型及杂合突变型，以验证 HRM 方法的可行性和准确性。结果表明，优化的 HRM 检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及.杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的 HRM 方法分析 30 个 CRISPR/Cas9 技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆，结果显示，14.个单克隆为杂合突变型、2 个单克隆为纯合突变型、14 个单克隆为野生型，与测序结果一致，准确率为 100%。本研究建立的高分.辨率熔解曲线法能对 CRISPR/Cas9 介导的细胞基因突变进行快速筛选，是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法