靶向小鼠Tyr基因的CRISPR/Cas9系统构建及打靶效力分析
靶向小鼠Tyr基因的CRISPR/Cas9系统构建及打靶效力分析
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DOI：
10.3969/j.issn.2095-1736.2021.05.034
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
于鸿浩
中科院分区：
文献类型：
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作者：
岳鹏鹏;杨光宇;王添贤;付灿;肖义然;于鸿浩
TYR基因编码酪氨酸酶,该基因变异影响黑色素的生成,是人类白化病的遗传学病因。研究利用OMIM、ExAC和ClinVar等数据库筛查人TYR基因的强致病突变位点,并通过蛋白序列比对分析将该位点定位于小鼠基因组上,然后基于定位位点的DNA序列和CRISPR/Cas9系统基因打靶的原理设计了3个向导RNA(small guide RNA,sgRNA)。通过sgRNA表达载体的构建、N2a细胞的共转染、药物筛选、PCR产物测序,以及TA克隆测序分析等实验步骤完成了3个sgRNA的打靶效力分析。TA克隆测序分析结果显示3个位点均发生了碱基的随机插入或缺失突变,突变效率均为100%,表明研究成功构建了高效的靶向小鼠Tyr基因,并可模拟人类白化病强致病突变的CRISPR/Cas9基因编辑系统,为进一步制备Tyr基因工程小鼠,深入研究Tyr基因变异的致病机制和探寻可靠治疗手段奠定了基础。