Structural and dynamic insights revealing how lipase binding domain MD1 of Pseudomonas aeruginosa foldase affects lipase activation
Structural and dynamic insights revealing how lipase binding domain MD1 of Pseudomonas aeruginosa foldase affects lipase activation
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结构和动态见解揭示铜绿假单胞菌折叠酶的脂肪酶结合域 MD1 如何影响脂肪酶激活
DOI：
10.1038/s41598-020-60093-4
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发表时间：
2020
影响因子：
4.6
通讯作者：
Jaeger KE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Viegas A;Dollinger P;Verma N;Kubiak J;Viennet T;Seidel CAM;Gohlke H;Etzkorn M;Kovacic F;Jaeger KE
革兰氏阴性菌的许多蛋白质的折叠和细胞定位依赖于分子伴侣和分泌系统的网络。其中包括脂肪酶特异性折叠酶Lif，这是一种膜结合的空间伴侣，可紧密结合（KD= 29 nM）并介导脂肪酶利帕（致病菌P的毒力因子）的折叠。铜绿。Lif由五个结构域组成，包括利帕折叠所必需的迷你结构域MD 1。然而，Lif-assisted利帕folding的分子机制仍然是难以捉摸的。在这里，我们显示在体外实验中使用的可溶性形式的Lif（sLif），隔离MD 1的ssLif辅助利帕激活。此外，激活利帕的能力在变体LifY 99 A中丧失，其中来自MD 1的螺旋α1的进化保守氨基酸Y 99突变为丙氨酸。这与通过偏振分辨荧光光谱法测定的变体对利帕的亲和力降低约三倍以及复合物中sLifY 99 A的灵活性增加相一致。我们解决了P的NMR溶液结构。aerodiosaMD 1和变体MD 1 Y 99 A显示相似的折叠，表明结构修饰可能不是变体LifY 99 A活性受损的原因。分子动力学模拟的thesLif：利帕复杂的刚性分析表明，从Y 99的sLif的活性位点的利帕，这可能是必不可少的利帕激活的相互作用的远程网络。这些研究结果提供了重要的细节推定机制利帕激活和点的一般机制的蛋白质折叠的多结构域空间伴侣。
Folding and cellular localization of many proteins of Gram-negative bacteria rely on a network of chaperones and secretion systems. Among them is the lipase-specific foldase Lif, a membrane-bound steric chaperone that tightly binds (KD= 29 nM) and mediates folding of the lipase LipA, a virulence factor of the pathogenic bacteriumP. aeruginosa. Lif consists of five-domains, including a mini domain MD1 essential for LipA folding. However, the molecular mechanism of Lif-assisted LipA folding remains elusive. Here, we show inin vitroexperiments using a soluble form of Lif (sLif) that isolated MD1 inhibitssLif-assisted LipA activation. Furthermore, the ability to activate LipA is lost in the variantsLifY99A, in which the evolutionary conserved amino acid Y99 from helix α1 of MD1 is mutated to alanine. This coincides with an approximately three-fold reduced affinity of the variant to LipA together with increased flexibility ofsLifY99Ain the complex as determined by polarization-resolved fluorescence spectroscopy. We have solved the NMR solution structures ofP. aeruginosaMD1 and variant MD1Y99Arevealing a similar fold indicating that a structural modification is likely not the reason for the impaired activity of variantsLifY99A. Molecular dynamics simulations of thesLif:LipA complex in connection with rigidity analyses suggest a long-range network of interactions spanning from Y99 ofsLif to the active site of LipA, which might be essential for LipA activation. These findings provide important details about the putative mechanism for LipA activation and point to a general mechanism of protein folding by multi-domain steric chaperones.
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革兰氏阴性菌脂肪酶特异性折叠酶的特异性和膜锚的作用
DOI：
10.1007/s004380050020
发表时间：
1999
期刊：
Molecular and General Genetics MGG
影响因子：
--
作者：
M. El Khattabi;C. Ockhuijsen;W. Bitter;K. Jaeger;J. Tommassen
通讯作者：
J. Tommassen
洋葱假单胞菌 DSM3959 脂肪酶与其伴侣 LimA 的相互作用。
DOI：
--
发表时间：
1995
期刊：
Journal of Biochemistry (Tokyo)
影响因子：
--
作者：
A. Hobson;C. Buckley;S. Jørgensen;B. Diderichsen;D. McConnell
通讯作者：
D. McConnell
解码Burkholderia glumae脂肪酶的折叠：在动力学稳定性的途中折叠中间体。
影响因子：
3.7
作者：
Pauwels K;Sanchez del Pino MM;Feller G;Van Gelder P
通讯作者：
Van Gelder P
催化蛋白质折叠的酶及其细胞功能。
影响因子：
2.8
作者：
N. Nagradova
通讯作者：
N. Nagradova
DOI：
10.1073/pnas.90.8.3670
发表时间：
1993-04-15
影响因子：
11.1
作者：
DODSON, KW;JACOBDUBUISSON, F;HULTGREN, SJ
通讯作者：
HULTGREN, SJ