Conversion of the reactive sulfhydryl groups of proteins to the S-trifluoroethyl derivatives. Application to human hemoglobin.
Conversion of the reactive sulfhydryl groups of proteins to the S-trifluoroethyl derivatives. Application to human hemoglobin.
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将蛋白质的反应性巯基转化为 S-三氟乙基衍生物。
DOI：
10.1016/0003-2697(81)90105-6
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发表时间：
1981
影响因子：
2.9
通讯作者：
Knowles,FC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Knowles,FC
S-2,2,2-三氟乙基残基 (-SCH2CF3) 已通过形成二硫键作为 Cys-β93 的外在探针掺入人血红蛋白 Hb4(SH)2 中。与5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)反应活化硫醇基团，再与2,2,2-三氟乙硫醇反应得到Hb4(SSCH2CF3)2。两个二硫键交换反应均使用血红蛋白（0.005 m 血红素）的稀溶液，使用适度过量的试剂来完成。每个二硫化物交换反应的化学计量很容易通过测量每个反应的产物5-硫代-2-硝基苯甲酸来确定。发现 Hb4(SSCH2CF3)2 的功能特性与 Hb4(SH)2 相似。在 pH 7.0 和 20°C 下，半饱和所需的氧分压在 0.050 m 2,2-双（羟甲基）-2,2',2"-次氮基三乙醇中为 0.45 mm Hg，在 0.050 m 磷酸钾中为 4.1 mm Hg，在 0.010 m 肌醇六磷酸中为 16.5 mm Hg。希尔图的 n 值分别为 1.45、1.80 和 2.3。一氧化碳衍生物的四聚体-二聚体解离反应 K4,2 的平衡常数为 2.1 × 10−7m。与一氧化碳结合的时间过程在 432 nm 处是均匀的。在肌醇六磷酸存在下，与一氧化碳结合的时间过程取决于波长。
The S-2,2,2-trifluoroethyl residue (-SCH2CF3) has been incorporated into human hemoglobin, Hb4(SH)2, as an extrinsic probe at Cys-β93 through formation of a disulfide bond. The thiol group was activated by reaction with 5,5′-dithiobis(2-nitrobenzoic acid), Hb4(SSCH2CF3)2then being obtained by reaction with 2,2,2-trifluoroethanethiol. Both disulfide interchange reactions proceed to completion with a modest excess of reagents using dilute solutions of hemoglobin (0.005 m heme). The stoichiometry of each disulfide interchange reaction is readily determined by measurement of 5-thio-2-nitrobenzoic acid, a product of each reaction. The functional properties of Hb4(SSCH2CF3)2were found to be similar to those of Hb4(SH)2. At pH 7.0 and 20°C the partial pressure of oxygen required for half saturation was 0.45 mm Hg in 0.050 m 2,2-bis(hydroxymethyl)-2,2′,2″-nitrilo-triethanol, 4.1 mm Hg in 0.050 m potassium phosphate, and 16.5 mm Hg in 0.010 m inositol hexaphosphate. The n values of the Hill plots were 1.45, 1.80, and 2.3, respectively. The equilibrium constant for the tetramer-dimer dissociation reaction, K4,2, of the carbon monoxide derivative was 2.1 × 10−7m. The time course for combination with carbon monoxide was homogeneous at 432 nm. In the presence of inositol hexaphosphate the time course of combination with carbon monoxide was wavelength dependent.
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--
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Q. Gibson
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F. Knowles
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F. Knowles
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Q. Gibson
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期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Q. Gibson
通讯作者：
Q. Gibson