A novel split kinesin assay identifies motor proteins that interact with distinct vesicle populations.
A novel split kinesin assay identifies motor proteins that interact with distinct vesicle populations.
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DOI：
10.1083/jcb.201205070
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发表时间：
2012-08-20
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Banker G
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Jenkins B;Decker H;Bentley M;Luisi J;Banker G
一种新的分裂驱动蛋白测定鉴定了三个驱动蛋白-3家族成员，它们特异性地与神经元中的树突状囊泡群体相互作用。识别与不同囊泡群体相互作用的驱动蛋白马达是一个长期存在且具有挑战性的问题，对细胞生物学的许多方面都有影响。在这里，我们介绍了一种新的活细胞测定，以评估驱动蛋白囊泡的相互作用，并用它来确定驱动蛋白结合到囊泡进行树突选择性运输培养海马神经元。我们制备了一个“分裂驱动蛋白”文库，包含一个轴突选择性驱动蛋白马达结构域和一系列可以附着在其天然囊泡上的驱动蛋白尾部结构域;当分裂驱动蛋白通过化学二聚化组装时，结合的囊泡被错误地引导到轴突中。该方法提供了高度特异性的结果，表明三个驱动蛋白-3家族成员-KIF 1A，KIF 13 A和KIF 13 B-与树突状囊泡群体相互作用。这种实验范式允许一个系统的方法来评估运动囊泡在活细胞中的相互作用。
A novel split kinesin assay identifies three Kinesin-3 family members that specifically interact with dendritic vesicle populations in neurons. Identifying the kinesin motors that interact with different vesicle populations is a longstanding and challenging problem with implications for many aspects of cell biology. Here we introduce a new live-cell assay to assess kinesin–vesicle interactions and use it to identify kinesins that bind to vesicles undergoing dendrite-selective transport in cultured hippocampal neurons. We prepared a library of “split kinesins,” comprising an axon-selective kinesin motor domain and a series of kinesin tail domains that can attach to their native vesicles; when the split kinesins were assembled by chemical dimerization, bound vesicles were misdirected into the axon. This method provided highly specific results, showing that three Kinesin-3 family members—KIF1A, KIF13A, and KIF13B—interacted with dendritic vesicle populations. This experimental paradigm allows a systematic approach to evaluate motor–vesicle interactions in living cells.
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影响因子：
25
作者：
Lewis, Tommy L., Jr.;Mao, Tianyi;Svoboda, Karel;Arnold, Don B.
通讯作者：
Arnold, Don B.
DOI：
10.1083/jcb.201104034
发表时间：
2011-07-25
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Nakata T;Niwa S;Okada Y;Perez F;Hirokawa N
通讯作者：
Hirokawa N
影响因子：
16.2
作者：
Jacobson, C;Schnapp, B;Banker, GA
通讯作者：
Banker, GA
影响因子：
9.2
作者：
Kapitein, Lukas C.;Schlager, Max A.;Hoogenraad, Casper C.
通讯作者：
Hoogenraad, Casper C.
影响因子：
--
作者：
Kaech, Stefanie;Huang, Chun-Fang;Banker, Gary
通讯作者：
Banker, Gary