体外神经细胞过表达Mex3C-1对诱导性Fos表达的影响
体外神经细胞过表达Mex3C-1对诱导性Fos表达的影响
复制标题
DOI：
10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2019.06.003
复制
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
杜勇
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
孙东君;霍泉;李婷;翟思凡;孙婷;杜勇
目的 探讨Mex3C-1 对卡巴胆碱诱导的Fos 表达的影响。方法将具有可持续表达人Mex3C-1 序列的质粒pLV-CMV-Mex3C（OE） 在HEK293T 细胞中包装成慢病毒载体，同时制备非特异性对照（NC）CmiR0001-MR03 的慢病毒载体，分别感染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y，经嘌呤霉素筛选后得到稳定高表达Mex3C-1 和阴性对照细胞系，用Real time PCR 和Western blot 方法检测Mex3C-1 的基因和蛋白表达效果。之后用卡巴胆碱诱导Fos 表达，在诱导0、30、60、90 和120min 后分别提取mRNA，采用Real time PCR 方法检测Fos mRNA 的相对表达量。结果Real time PCR 检测结果显示，OE 组的Mex3C-1 mRNA 的相对表达量（21.11±0.60） 高于NC 组（1.03±0.13）（t=32.63，P=0.000）。Western blot 结果显示，在82kDa 处OE 组的Mex3C-1 蛋白表达量高于NC 组（P<0.001）。Real time PCR 检测不同干预时间两组Fos mRNA，除0min 外各个时间点OE 组均高于NC 组，表明Mex3C-1 的过表达可以明显上调Fos mRNA 的表达；NC 组于120min 时已基本恢复至基础值，而OE 组120min 时Fos mRNA 表达量仍然较高，Mex3C-1 过表达可以延长Fos mRNA 的半衰期，增强其稳定性，OE 组与阴性对照NC 组比较，Fos mRNA 表达量差异有统计学意义（F=287.069，P=0.000）。结论持续过表达Mex3C-1 的人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞系建立成功，且Mex3C-1 过表达能够明显增强卡巴胆碱诱导的Fos 表达程度并增强其稳定性。