HCV resistance to cyclosporin A does not correlate with a resistance of the NS5A-cyclophilin A interaction to cyclophilin inhibitors.
HCV resistance to cyclosporin A does not correlate with a resistance of the NS5A-cyclophilin A interaction to cyclophilin inhibitors.
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DOI：
10.1016/j.jhep.2010.01.041
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发表时间：
2010-07
影响因子：
25.7
通讯作者：
Gallay PA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chatterji U;Lim P;Bobardt MD;Wieland S;Cordek DG;Vuagniaux G;Chisari F;Cameron CE;Targett-Adams P;Parkinson T;Gallay PA
亲环素（Cyp）抑制剂环孢素A （CsA）、NIM811、Debio 025和SCY 635在体外和体内都能阻断丙型肝炎病毒的复制，是一类新型的有效抗丙型肝炎病毒药物。我们和其他人发现HCV依赖于亲环蛋白A （CypA）进行复制。我们证明了CypA的疏水性口袋，即cypp抑制剂结合的地方，它控制着CypA的异构酶活性，对HCV复制至关重要。最近的研究表明，在Cyp抑制剂选择下，HCV非结构5A （NS5A）蛋白发生突变。这使我们假设CypA通过作用于NS5A来辅助HCV。我们通过开发多种相互作用试验来验证这一假设，包括GST下拉试验、ELISA和双杂交哺乳动物结合试验。我们证明全长NS5A和CypA形成稳定的复合物。值得注意的是，CsA以剂量依赖的方式阻止CypA-NS5A相互作用。重要的是，CypA-NS5A相互作用在基因型之间是保守的，并被CsA中断。令人惊讶的是，在csa耐药HCV变异中出现的NS5A突变蛋白在CypA结合和csa介导的CypA释放方面与野生型NS5A相似。后一项发现表明，HCV对CsA的耐药性与CypA-NS5A相互作用对Cyp抑制剂的耐药性无关。此外，我们发现缺乏异构酶活性的CypA不能结合NS5A。综上所述，这些数据表明CypA通过其异构酶袋直接与NS5A结合，最重要的是，破坏这种相互作用可以阻止HCV复制。
The cyclophilin (Cyp) inhihibitors - cyclosporine A (CsA), NIM811, Debio 025 and SCY 635 - block HCV replication both in vitro and in vivo, and represent a novel class of potent anti-HCV agents. We and others showed that HCV relies on cyclophilin A (CypA) to replicate. We demonstrated that the hydrophobic pocket of CypA, where Cyp inhibitors bind, and which controls the isomerase activity of CypA, is critical for HCV replication. Recent studies showed that under Cyp inhibitor selection, mutations arose in the HCV nonstructural 5A (NS5A) protein. This led us to postulate that CypA assists HCV by acting on NS5A. We tested this hypothesis by developing several interaction assays including GST pulldown assays, ELISA and two-hybrid mammalian binding assays. We demonstrated that full-length NS5A and CypA form a stable complex. Remarkably, CsA prevents the CypA-NS5A interaction in a dose-dependent manner. Importantly, the CypA-NS5A interaction is conserved among genotypes and is interrupted by CsA. Surprisingly, the NS5A mutant protein, which arose in CsA-resistant HCV variants, behaves similarly to wild-type NS5A in terms of both CypA-binding and CsA-mediated release from CypA. This latter finding suggests that HCV resistance to CsA does not correlate with a resistance of the CypA-NS5A interaction to Cyp inhibitors. Moreover, we found that CypA, devoid of its isomerase activity, fails to bind NS5A. Altogether these data suggest that CypA, via its isomerase pocket, binds directly to NS5A, and most importantly, that disrupting this interaction stops HCV replication.
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