The N-terminus of apolipoprotein A-V adopts a helix bundle molecular architecture.
The N-terminus of apolipoprotein A-V adopts a helix bundle molecular architecture.
复制标题
DOI：
10.1021/bi800515c
复制
发表时间：
2008-08-19
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Ryan, Robert O.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wong, Kasuen;Beckstead, Jennifer A.;Lee, Dustin;Weers, Paul M. M.;Guigard, Emmanuel;Kay, Cyril M.;Ryan, Robert O.
先前对重组全长人载脂蛋白A - V（apoA - V）的研究提供了存在两个独立折叠结构域的证据。计算机辅助序列分析和有限的蛋白水解研究确定了一个N末端片段为其中一个结构域的候选者。在此大小范围内的C末端截短变体，apoA - V（1 - 146）和apoA - V（1 - 169），在大肠杆菌中表达并分离出来。与全长apoA - V或apoA - V（1 - 169）不同，apoA - V（1 - 146）在无脂质的情况下可溶于中性pH缓冲液。沉降平衡分析得出重均分子量为18811，表明apoA - V（1 - 146）在溶液中以单体形式存在。在pH 3.0下的盐酸胍变性实验产生了一个从天然态到变性态的一步转变，这与全长apoA - V所呈现的两阶段变性曲线中更稳定的组分直接对应。另一方面，在pH 7.0下进行的变性实验显示其结构不太稳定。与已知的螺旋束载脂蛋白类似，apoA - V（1 - 146）引起8 - 苯胺基 - 1 - 萘磺酸荧光强度相对较小的增强。对单色氨酸apoA - V（1 - 146）变体的猝灭研究表明，一个预测位于两亲性α - 螺旋非极性面上的独特位点受到碘化钾猝灭的保护。综上所述，数据表明人apoA - V的146个N末端残基在无脂质的情况下采用螺旋束分子结构，因此在完整蛋白质的背景下可能作为一个独立折叠的结构域存在。
Previous studies of recombinant full-length human apolipoprotein A-V (apoA-V) provided evidence of the presence of two independently folded structural domains. Computer-assisted sequence analysis and limited proteolysis studies identified an N-terminal fragment as a candidate for one of the domains. C-Terminal truncation variants in this size range, apoA-V(1–146) and apoA-V(1–169), were expressed in Escherichia coli and isolated. Unlike full-length apoA-V or apoA-V(1–169), apoA-V(1–146) was soluble in neutral-pH buffer in the absence of lipid. Sedimentation equilibrium analysis yielded a weight-average molecular weight of 18811, indicating apoA-V(1–146) exists as a monomer in solution. Guanidine HCl denaturation experiments at pH 3.0 yielded a one-step native to unfolded transition that corresponds directly with the more stable component of the two-stage denaturation profile exhibited by full-length apoA-V. On the other hand, denaturation experiments conducted at pH 7.0 revealed a less stable structure. In a manner similar to that of known helix bundle apolipoproteins, apoA-V(1–146) induced a relatively small enhancement in 8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid fluorescence intensity. Quenching studies with single-Trp apoA-V(1–146) variants revealed that a unique site predicted to reside on the nonpolar face of an amphipathic α-helix was protected from quenching by KI. Taken together, the data suggest the 146 N-terminal residues of human apoA-V adopt a helix bundle molecular architecture in the absence of lipid and, thus, likely exist as an independently folded structural domain within the context of the intact protein.
登录
查看更多内容
影响因子：
2.9
作者：
Evans, Clare-Louise;Long, Jed E.;Searle, Mark S.
通讯作者：
Searle, Mark S.
影响因子：
9.3
作者：
Alborn, WE;Johnson, MG;Konrad, RJ
通讯作者：
Konrad, RJ
影响因子：
4.8
作者：
Beckstead, Jennifer A.;Wong, Kasuen;Ryan, Robert O.
通讯作者：
Ryan, Robert O.
DOI：
10.1139/bcb-75-1-45
发表时间：
1997-01-01
期刊：
BIOCHEMISTRY AND CELL BIOLOGY-BIOCHIMIE ET BIOLOGIE CELLULAIRE
影响因子：
--
作者：
Fisher, CA;Wang, JJ;Ryan, RO
通讯作者：
Ryan, RO
DOI：
10.1073/pnas.96.8.4366
发表时间：
1999-04-13
影响因子：
11.1
作者：
Narayanaswami, V;Wang, JJ;Ryan, RO
通讯作者：
Ryan, RO