HLA-DRB1 genotyping by modified PCR-RFLP method combined with group-specific primers.
HLA-DRB1 genotyping by modified PCR-RFLP method combined with group-specific primers.
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采用改良 PCR-RFLP 方法结合群体特异性引物进行 HLA-DRB1 基因分型。
作者：
M. Ota;T. Seki;H. Fukushima;K. Tsuji;H. Inoko
我们之前使用改良的PCR-RFLP方法引入了HLA- dqa1， -DPB1和DQB1基因分型，使用一些信息限制性内切酶，这些限制性内切酶在扩增的DNA区域有单个裂解位点或无裂解位点，这取决于HLA等位基因，使RFLP带型的读取更加容易。在本研究中，除了DRB1*1103和*1104没有限制性内切酶来区分外，43个HLA-DRB1等位基因可以通过改进的PCR-RFLP方法结合7对群体特异性引物来定义。DRB1* 07001和DRB1*0702无法区分，因为它们在DRB1的第二个外显子上是相同的。对于DR1-DRB1、DR2-DRB1、DR4-DRB1、DR7-DR1、DR9-DRB1、DRw10-DRB1或DRw52相关抗原（DR3、w11、w12、w13、w14和DRw8）-DRB1基因扩增，采用PCR方法从70株hla纯合子b细胞系和健康日本人的基因组dna中，使用每个群体特异性引物选择性扩增DRB1基因的第二个外显子。扩增的DNA用限制性内切酶酶切，然后进行电泳分析，简单地切割或不切割DNA，尽管一些等位基因只能通过检查生成的RFLP带型和在某些情况下使用两种限制性内切酶的双重酶切技术来区分。这种改进的PCR-RFLP方法可以成功地应用于所有可能的DRB1杂合子，尽管其中有15对杂合子在理论上无法被PCR-SSO方法区分，因为PCR-RFLP方法可以通过检查双酶切产生的RFLP带的长度来判断两个多态性位点是相互连接（顺式位置）还是位于不同的染色体上（反式位置）。因此，PCR-RFLP方法在技术上简单、实用且廉价，可用于常规HLA分型工作中测定HLA- drb1等位基因。
We previously introduced HLA-DQA1, -DPB1 and DQB1 genotyping with the modified PCR-RFLP method using some informative restriction enzymes which have either a single cleavage site or alternatively no cleavage site in the amplified DNA region, depending on the HLA alleles, making reading of RFLP band patterns much easier. In this study, 43 HLA-DRB1 alleles, excluding DRB1*1103 and *1104 for which no restriction enzymes are available to distinguish each from the other, could be defined by this modified PCR-RFLP method combined with 7 pairs of group-specific primers. It is impossible to distinguish DRB1*0701 and DRB1*0702 as they are identical for the second exon of DRB1. For DR1-DRB1, DR2-DRB1, DR4-DRB1, DR7-DR1, DR9-DRB1, DRw10-DRB1 or DRw52 associated antigens (DR3, w11, w12, w13, w14, and DRw8)-DRB1 gene amplification, the second exon of the DRB1 gene was selectively amplified using each group-specific primer from genomic DNAs of 70 HLA-homozygous B-cell lines and healthy Japanese by PCR. Amplified DNAs were digested with restriction endonucleases and then subjected to electrophoresis assaying simply for cutting, or no cutting, of the DNA, although some alleles can be distinguished only after examination of RFLP band patterns generated and in some cases using double digestion technique with two restriction enzymes. This modified PCR-RFLP method can be successfully applied to all possible DRB1 heterozygotes, despite the fact that 15 pairs of heterozygotes among them cannot be distinguished theoretically by the PCR-SSO method, because the PCR-RFLP method can tell whether two polymorphic sites are linked to each other (cis position) or located on a different chromosome (trans position) by checking the length of RFLP bands generated with double digestion. Thus, the PCR-RFLP method is technically simple, practical and inexpensive for determination of the HLA-DRB1 alleles for routine HLA typing work.
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通过等位基因特异性或群体特异性扩增对 II 类 HLA 抗原进行 DNA 分型。
影响因子：
2.7
作者：
Gao,XJ;Moraes,JR;Miller,S;Stastny,P
通讯作者：
Stastny,P
通过等位基因特异性或群体特异性扩增对 II 类 HLA 抗原进行 DNA 分型。
影响因子：
2.7
作者：
Fernandez-Vina,M;Moraes,ME;Stastny,P
通讯作者：
Stastny,P
AFLP 的 HLA-DR 通用分型。
影响因子：
--
作者：
Yunis,I;Salazar,M;Yunis,EJ
通讯作者：
Yunis,EJ
通过等位基因特异性或群体特异性扩增对 II 类 HLA 抗原进行 DNA 分型。
影响因子：
2.7
作者：
Moraes,ME;Fernandez-Viña,M;Stastny,P
通讯作者：
Stastny,P