Design of an in vivo cleavable disulfide linker in recombinant fusion proteins.
Design of an in vivo cleavable disulfide linker in recombinant fusion proteins.
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DOI：
10.2144/000113450
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发表时间：
2010-07
期刊：
影响因子：
2.7
通讯作者：
Shen WC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen X;Bai Y;Zaro JL;Shen WC
为了实现最佳的生物活性和所需的药代动力学特征，设计了二硫环肽接头用于从重组融合蛋白体内释放蛋白质结构域。这种新的体内可切割的二硫键接头，基于含有凝血酶敏感序列和分子内二硫键的二硫环肽，插入转铁蛋白和粒细胞集落刺激因子重组融合蛋白结构域之间。在融合蛋白G-C-T从HEK 293细胞表达后，体外凝血酶处理产生通过可逆二硫键连接的融合蛋白，其在体内快速裂解，分离蛋白质结构域。从融合蛋白释放后，游离G-CSF在细胞增殖测定中表现出改善的生物活性。尽管可逆二硫键通常用于蛋白质化学缀合方法，但据我们所知，该报告是构建具有二硫键的重组融合蛋白以释放功能结构域的第一个实例。这种接头设计可适用于不同的重组融合蛋白，其中需要蛋白质结构域的体内分离以实现功能结构域的改善的治疗效果和期望的药代动力学特征和生物分布。
In order to achieve an optimal biological activity and desired pharmacokinetic profiles, a dithiocyclopeptide linker was designed for in vivo release of protein domains from a recombinant fusion protein. This novel in vivo cleavable disulfide linker, based on a dithiocyclopeptide containing a thrombin-sensitive sequence and an intra-molecular disulfide bond, was inserted between transferrin and granulocyte colony-stimulating factor recombinant fusion protein domains. After expression of the fusion protein, G-C-T, from HEK293 cells, thrombin treatment in vitro generated a fusion protein linked via a reversible disulfide bond that was quickly cleaved in vivo, separating the protein domains. After release from the fusion protein, free G-CSF exhibited an improved biological activity in a cell proliferation assay. Although reversible disulfide bonds are commonly used in protein chemical conjugation methods, to our knowledge this report is the first example of the construction of a recombinant fusion protein with a disulfide linkage for the release of the functional domain. This linker design can be adapted to diverse recombinant fusion proteins where in vivo separation of protein domains is required to achieve an improved therapeutic effect, and a desirable pharmacokinetic profile and biodistribution, of the functional domain.
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DOI：
10.1093/protein/14.8.529
发表时间：
2001-08-01
期刊：
PROTEIN ENGINEERING
影响因子：
--
作者：
Arai, R;Ueda, H;Nagamune, T
通讯作者：
Nagamune, T
影响因子：
3.7
作者：
Amet, Nurmamet;Lee, Hsin-Fang;Shen, Wei-Chiang
通讯作者：
Shen, Wei-Chiang
DOI：
10.1107/s0907444906029799
发表时间：
2006-10-01
影响因子：
2.2
作者：
Aricescu, A. Radu;Lu, Weixian;Jones, E. Yvonne
通讯作者：
Jones, E. Yvonne
影响因子：
15.9
作者：
LETVIN, NL;GOLDMACHER, VS;LAMBERT, JM
通讯作者：
LAMBERT, JM
影响因子：
5.8
作者：
Yao, ZS;Dai, WL;Sung, C
通讯作者：
Sung, C