Site-Specific Inhibitors of NADPH Oxidase Activity and Structural Probes of Flavocytochrome b: Characterization of Six Monoclonal Antibodies to the p22phox Subunit1
Site-Specific Inhibitors of NADPH Oxidase Activity and Structural Probes of Flavocytochrome b: Characterization of Six Monoclonal Antibodies to the p22phox Subunit1
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NADPH 氧化酶活性的位点特异性抑制剂和黄细胞色素 b 的结构探针：针对 p22phox 亚基 1 的六种单克隆抗体的表征
作者：
Ross M. Taylor;J. B. Burritt;D. Baniulis;T. R. Foubert;Connie I. Lord;M. Dinauer;C. Parkos;A. J. Jesaitis
整合膜蛋白黄细胞色素 b (Cyt b) 是人类吞噬细胞 NADPH 氧化酶的催化核心，NADPH 氧化酶是一种酶复合物，可启动活性氧级联反应，对于消除传染源至关重要。本研究报告了识别 Cyt b 异二聚体 p22phox 亚基的六种 mAb（NS1、NS2、NS5、CS6、CS8 和 CS9）的生成和表征。每种 mAb 通过蛋白质印迹分析特异性检测到 p22phox，但在 FACS 研究中不与完整的中性粒细胞发生反应。噬菌体展示图谱鉴定出 mAb NS2、NS5、CS6、CS8 和 CS9 识别的核心表位区域。荧光共振能量转移实验表明，mAb CS6 和 CS8 与 Cascade Blue 标记的 mAb 44.1（一种先前表征的 p22phox 特异性 mAb）有效竞争与 Cyt b 的结合，支持噬菌体展示结果，表明所有三种 Ab 均识别 p22phox 的共同区域。能量转移实验还表明 mAb CS9 和 mAb NS1 结合位点与 mAb 44.1 表位的空间接近性，同时表明 mAb NS5 和 mAb 44.1 表位之间的接近性更远。无细胞氧化酶测定表明，mAb CS9 能够以浓度依赖性方式显着抑制超氧化物产生，其中 mAb NS1、NS5、CS6 和 CS8 具有中等水平的抑制作用。结合计算预测、可用实验数据和本研究报告的 mAb 获得的结果，用于生成 p22phox 的新型拓扑模型。
The integral membrane protein flavocytochrome b (Cyt b) is the catalytic core of the human phagocyte NADPH oxidase, an enzyme complex that initiates a cascade of reactive oxygen species important in the elimination of infectious agents. This study reports the generation and characterization of six mAbs (NS1, NS2, NS5, CS6, CS8, and CS9) that recognize the p22phox subunit of the Cyt b heterodimer. Each of the mAbs specifically detected p22phox by Western blot analysis but did not react with intact neutrophils in FACS studies. Phage display mapping identified core epitope regions recognized by mAbs NS2, NS5, CS6, CS8, and CS9. Fluorescence resonance energy transfer experiments indicated that mAbs CS6 and CS8 efficiently compete with Cascade Blue-labeled mAb 44.1 (a previously characterized, p22phox-specific mAb) for binding to Cyt b, supporting phage display results suggesting that all three Abs recognize a common region of p22phox. Energy transfer experiments also suggested the spatial proximity of the mAb CS9 and mAb NS1 binding sites to the mAb 44.1 epitope, while indicating a more distant proximity between the mAb NS5 and mAb 44.1 epitopes. Cell-free oxidase assays demonstrated the ability of mAb CS9 to markedly inhibit superoxide production in a concentration-dependent manner, with more moderate levels of inhibition observed for mAbs NS1, NS5, CS6, and CS8. A combination of computational predictions, available experimental data, and results obtained with the mAbs reported in this study was used to generate a novel topology model of p22phox.
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影响因子：
3.5
作者：
Cheng, GJ;Cao, ZH;Lambeth, JD
通讯作者：
Lambeth, JD
在慢性肉芽肿病的两种遗传形式中，人中性粒细胞细胞色素 b 的 91kD 和 22kD 亚基均缺失。
影响因子：
20.3
作者：
Parkos,CA;Dinauer,MC;Jesaitis,AJ;Orkin,SH;Curnutte,JT
通讯作者：
Curnutte,JT
影响因子：
15.9
作者：
PARKOS, CA;ALLEN, RA;JESAITIS, AJ
通讯作者：
JESAITIS, AJ
9 个由 CYBA（编码 p22(phox) 的基因）突变引起的慢性肉芽肿病新家族的分子分析。
影响因子：
20.3
作者：
Rae,J;Noack,D;Heyworth,PG;Ellis,BA;Curnutte,JT;Cross,AR
通讯作者：
Cross,AR
通过荧光共振能量转移观察阴离子两亲物和磷脂诱导的人中性粒细胞黄素细胞色素 b 的构象变化。
DOI：
10.1016/j.bbamem.2004.03.009
发表时间：
2004
期刊：
Biochimica et biophysica acta
影响因子：
--
作者：
Taylor,RossM;Foubert,ThomasR;Burritt,JamesB;Baniulis,Danas;McPhail,LindaC;Jesaitis,AlgirdasJ
通讯作者：
Jesaitis,AlgirdasJ