家蚕microRNA 7靶基因Bmhairy的鉴定和转录表达模式
家蚕microRNA 7靶基因Bmhairy的鉴定和转录表达模式
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DOI：
10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.018
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
夏庆友
中科院分区：
文献类型：
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作者：
刘仕平;吴小燕;张丹宇;黄亚玺;王伟;赵萍;夏庆友
【目的】microRNA 是一类长约 22 个碱基的非编码 RNA，通过与其靶基因的特异性结合来调控新陈代谢和生长发育等多种生命活动。鉴定家蚕(Bombyx mori)Bmhairy，比较 Bmhairy 和 bmo-miR-7 的表达模式，验证Bmhairy 是否为 bmo-miR-7 的靶基因，为研究家蚕的变态发育机制提供线索。【方法】 用家蚕胚胎反转期的总 RNA反转录合成的 cDNA 模板，克隆 Bmhairy 编码区（coding DNA sequence，CDS）和 3′端非翻译区（3′ untranslated region，3′UTR）并进行序列分析。基于荧光定量 PCR 和芯片数据比较 bmo-miR-7 和 Bmhairy 的表达模式。利用RNAhybrid 和 MiRTif，预测和分析 Bmhairy 的 mRNA 3′UTR 上 bmo-miR-7 的靶位点。构建荧光素酶报告基因载体，用家蚕胚胎细胞系（BmE）进行共转染试验，验证 bmo-miR-7 对 Bmhairy 的 3′UTR 结合位点。【结果】 在家蚕中克隆了 Bmhairy，含 2 个内含子和 3 个外显子，CDS 长 654 bp，编码 217 个氨基酸。 Bmhairy 的 mRNA 3′UTR 长 366 nt。Bmhairy 高度保守，含有 bHLH、ORANGE 和 WRPW 结构域。Bmhairy 与鳞翅目（Lepidoptera）蛱蝶科（Nymphalidae）中的黑脉金斑蝶（ Danaus plexippus）相似度最高。Bmo-miR-7 在家蚕胚胎期高量表达，在 5 龄第 3 天的精巢中相对较高， 而 Bmhairy 在成虫期的表达量最高， 在 5 龄第 3 天的头部相对较高。 Bmhairy mRNA 3′UTR 上有 bmo-miR-7一个靶位点。共转染试验表明，bmo-miR-7 下调 Bmhairy。【结论】 Bmhairy 的家蚕时期表达和 5 龄第 3 天组织表达均与 bmo-miR-7 的表达呈相反的模式。 靶基因预测和双荧光素酶转染试验表明 Bmhairy 是 bmo-miR-7 的靶基因，为进一步研究 bmo-miR-7 和 Bmhairy 在家蚕体内的生物学功能及调控关系提供了依据。