Protein kinase C isoforms in bovine aortic endothelial cells: role in regulation of P2Y‐ and P2U‐purinoceptor‐stimulated prostacyclin release
Protein kinase C isoforms in bovine aortic endothelial cells: role in regulation of P2Y‐ and P2U‐purinoceptor‐stimulated prostacyclin release
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牛主动脉内皮细胞中的蛋白激酶 C 亚型：在调节 P2Y 和 P2U 嘌呤受体刺激的前列环素释放中的作用
DOI：
--
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发表时间：
1996
影响因子：
7.3
通讯作者：
M. Boarder
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
V. Patel;C. Brown;M. Boarder
1 .牛主动脉内皮细胞对ATP和ADP的反应中前列环素（PGI 2）和多磷酸肌醇的合成增强由共存的P2 Y-和P2 U-嘌呤受体介导。在这里，我们研究这些反应的蛋白激酶C（PKC）的亚型的调节。二、用8种不同PKC亚型特异性抗血清进行免疫印迹，发现存在α、β、γ、δ、η和θ亚型，而未发现免疫反应性。在未刺激的细胞中，PKC-α主要是胞质的，并且在用PKC活化佛波酯肉豆蔻酸酯乙酸酯（PMA）处理1分钟后，几乎所有都易位到膜（Triton X-100可溶性）; PKC-α总是在Triton X-100不溶性膜部分中，而在未刺激的细胞中发现PKC-α以可溶性和膜结合（Triton X-100可溶性）形式存在，并且不受PMA的影响。3 .第三章。PMA处理6 h导致PKC-α下调90%，而对e和β亚型的免疫反应性基本保持不变。四、暴露于PMA 10 min或6 h后，PGI 2对两种受体活化的反应增强，而肌醇1，4，5-三磷酸对P2 Y-嘌呤受体活化的反应基本减弱，P2 U-嘌呤受体反应不变。因此，在90%的PKC-α丢失的条件下，PGI 2对PMA的反应类似于PMA对PKC的急性刺激，并且PGI 2反应与磷脂酶C反应无关。五、用亚型非选择性抑制剂Ro 31-8220和Go 6850抑制PKC可消除PGI 2对P2 U-和P2 Y-嘌呤受体刺激的反应。然而，Go 6976优先抑制Ca 2+敏感的亚型（如PKC-α）而不是Ca 2+不敏感的亚型（如PKC-β），对PGI 2反应没有影响。六、结果表明，在内皮细胞P2 Y-和P2 U-嘌呤受体刺激PGI 2产生中需要PKC。下调和抑制研究均表明，PKC-α不负责调节对P2-嘌呤能刺激的反应，并暗示该反应由PKC-β（PKC-β对PMA无反应）或尚未表征的PKC亚型介导。
1 . Enhanced synthesis of prostacyclin (PGI2) and inositol polyphosphates in bovine aortic endothelial cells in response to ATP and ADP is mediated by co‐existing P2Y‐ and P2U‐purinoceptors. Here we examine the regulation of these responses by isoforms of protein kinase C (PKC). 2 . Immunoblots with antisera specific for 8 different PKC isoforms revealed the presence of α, ∍ and ζ, while no immunoreactivity was found for β, γ, δ, η and θ isoforms. PKC‐α was largely cytosolic in unstimulated cells and almost all translocated to the membrane (Triton X‐100 soluble) after a 1 min treatment with the PKC activating phorbol myristate acetate (PMA); PKC‐∍ was always in a Triton X‐100 insoluble membrane fraction, while PKC‐ζ was found in both soluble and membrane bound (Triton X‐100 soluble) forms in the unstimulated cells and was unaffected by PM A. 3 . Treatment with PM A for 6 h led to a 90% downregulation of PKC‐α, while the immunoreactivity to the e and ζ isoforms remained largely unchanged. 4 . After either 10 min or 6 h exposure to PM A the PGI2 response to activation of both receptors was enhanced, while the inositol 1,4,5‐trisphosphate response to P2Y‐purinoceptor activation was substantially attenuated and the P2U‐purinoceptor response was unchanged. Thus the PGI2 response to PM A under conditions when 90% of the PKC‐α was lost resembles that seen on acute stimulation of PKC by PMA, and the PGI2 response does not correlate with the phospholipase C response. 5 . Inhibition of PKC with the isoform non‐selective inhibitors, Ro 31–8220 and Go 6850 abolished the PGI2 response to both P2U‐ and P2Y‐purinoceptor stimulation. However, Go 6976, which preferentially inhibits Ca2+ sensitive isoforms (such as PKC‐α) and not Ca2+ insensitive isoforms (such as PKC‐∍), had no effect on the PGI2 response. 6 . The results show that there is a requirement for PKC in the stimulation of PGI2 production by endothelial P2Y‐ and P2U‐purinoceptors. Both downregulation and inhibition studies show that PKC‐α is not responsible for the regulation of the response to P2‐purinergic stimulation, and imply that the response is mediated by PKC‐∍ (PKC‐ζ is unresponsive to PMA), or an as yet uncharacterized PKC isoform.
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血管内皮细胞中的核苷酸受体被完全电离形式的 ATP 和 UTP 特异性激活。
DOI：
10.1042/bj2840733
发表时间：
1992
期刊：
The Biochemical journal
影响因子：
--
作者：
Lustig,KD;Sportiello,MG;Erb,L;Weisman,GA
通讯作者：
Weisman,GA
DOI：
--
发表时间：
1994-06
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Michel Pucéat;R. Hilal-Dandan;B. Strulovici;L. Brunton;Joan Heller Brown
通讯作者：
Michel Pucéat;R. Hilal-Dandan;B. Strulovici;L. Brunton;Joan Heller Brown
转导蛋白 β γ 亚基对牛视杆外节中磷脂酶 A2 活性的刺激及其 α 亚基的抑制作用。
DOI：
10.1073/pnas.84.11.3623
发表时间：
1987
影响因子：
11.1
作者：
Jelsema,CL;Axelrod,J
通讯作者：
Axelrod,J
内皮细胞中磷脂酰肌醇释放花生四烯酸的 Ca2 依赖性和非 Ca2 依赖性途径。
DOI：
--
发表时间：
1987
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Martin,TW;Wysolmerski,RB
通讯作者：
Wysolmerski,RB
GTP 结合蛋白调节分离人血小板膜中磷脂酶 A2 活性的证据。
DOI：
--
发表时间：
1989
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Silk,ST;Clejan,S;Witkom,K
通讯作者：
Witkom,K